Biometría Hemática

Biometria hematica

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA

Objetivo: Una prueba de hemoglobina es un examen que mide la cantidad total de hemoglobina en la sangre y casi siempre hace parte de un conteo sanguíneo completo (CSC)

Introducción: Es una proteína conjugada de color rojo integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%. Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente.

La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.

Material:

 Tubos de ensayo de 13 x 100 ml

 Pipetas de 1ml

 Pipetas de Salí

 Boquillas

 Gradillas

 Gasa

 Celdas para espectrofotómetro

 Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

Reactivos:

 EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)

 Reactivo DE Drabkin:

 Ferrocianuro de potasio

 Cianuro de potasio

 Bicarbonato de potasio

 Solución estándar de cianometahemoglobina.

Procedimiento:

1.- En un tubo de ensayo, colocar 5 ml de reactivo de Drabkin2.- Homogeneizar bien la sangre3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Salhi4.- Introducir la pipeta con sangre al tubo de ensayo y dejar caer la sangre, después mezclar bien la muestra.5.- Se deja Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina6.- Calibrar primero el manómetro y después leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blanco de reactivo.7.- comparar con la curva calibrada de estándares.

Valores de referencia:

Mujeres: 12 -14 gr/dlMujeres embarazadas: 11-14 gr/dlHombres: 13-19gr/dlRecién nacidos: 13.19gr/dl

DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO

Objetivo: Es el porcentaje del volumen total de sangre compuesto de glóbulos rojos. Es una medición compuesta por el tamaño y número de GR y casi siempre es parte de un conteo sanguíneo completo (CSC). Dicho conteo mide el número de glóbulos rojos (GR), glóbulos blancos (GB), la cantidad total de hemoglobina en la sangre y la fracción de la sangre compuesta de glóbulos rojos (hematocrito).

Introducción: El hematocrito mide el porcentaje del volumen de sangre total pero, ocupada solamente por los eritrocitos La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte interior del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del antebrazo con el fin de ejercer presión y restringir el flujo sanguíneo a través de la vena, lo cual hace que las venas bajo la banda se llenen de sangre.Inmediatamente después, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado.En los bebés o niños pequeños, el área se limpia con un antiséptico y se punza con una aguja o lanceta para luego recoger la sangre en una pipeta (tubo pequeño de vidrio), en una lámina de vidrio, sobre una tira de examen o en un recipiente pequeño. Finalmente, se puede aplicar un algodón o un vendaje en el sitio de la punción si el sangrado persiste.En el laboratorio, se toma un poco de la sangre y se introduce en una máquina centrífuga, proceso que impulsa las células hacia el fondo del recipiente. La porción celular se compara con la cantidad total de la sangre y se expresa en porcentaje. De hecho, dicha porción celular representa casi la totalidad de los glóbulos rojos, mientras que el porcentaje de glóbulos blancos es muy pequeño.

Material:

 Tubo de Wintrobe que tiene 11.5 cm de largo x 3 mm de luz (hueco). Para el micro se usa el tubo capilar)

 Pipeta Pasteur larga o Cánula

 Centrífuga

 Sangre capilar (micro) o venosa (macro) con anticoagulante

Procedimiento:

 Después de extraer la muestra de sangre se coloca en el tubo de ensayo con el anticoagulante.

 Homogenizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo.

 Utilizando la pipeta Pasteur o canula para llenar de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta 10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo

 Centrífuga a 3600 rpm. Durante 30 min.

 Ver resultado.

Valores de referencia:

H= 47 +- 2.5M= 42+- 2.5

CUENTA ERITROCITARIA

Objetivo: Es un examen de sangre que mide el número de glóbulos rojos (GR) en la sangre y casi siempre se realiza como parte de un conteo sanguíneo completo (CSC) Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total.

Introducción: Los glóbulos rojos sanguíneos transportan la hemoglobina que, a su vez, transporta el oxígeno. La cantidad de oxígeno recibida por el tejido depende de la cantidad y función de los glóbulos rojos y la hemoglobina. Normalmente, los glóbulos rojos sobreviven aproximadamente 120 días en la sangre, luego son removidos por células especializadas en el bazo y en el hígado. Cuando la eritropoyésis tiene lugar normalmente, su resultado final es la producción de una célula-eritrocito perfectamente diferenciada y apta para su función principal que es la de transportar oxígeno y CO2 . La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear el oxígeno sin consumir prácticamente nada de el; su forma bicóncava es la que mejor se presta para afrontar la hemólisis; su membrana no admite la salida de hemoglobina.

Material:

 Tubos de ensayo de 13x100mm

 Pipetas de Thomas para glóbulos rojos

 Cámara de Neubauer

 Boquillas

 Microscopio

 Gasa

 Gradilla

 Sangre capilar o venosa con anticoagulante

Reactivos:

 EDTA (sal di sódica) al 10%

 Líquido de Hayem:

 Cloruro de mercurio 0.5 g

 Cloruro de sodio 1.0g

 Sulfato de sodio 5.0g

 Agua destilada 100ml

Procedimiento:

 llenar con sangre bien mezclada la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5. (Las pipetas están constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0.En el interior del bulbo existe una perlita de plástico (roja), para favorecer la mezcla de la sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca 101)

 Se limpia cuidadosamente con gasa la parte externa de la pipeta para no contaminar el liquido de harem al introducir la pipeta.

 Llenar la pipeta con líquido de Hayem hasta la marca 101.

 Agitar durante 3 minutos para mezclar perfectamente.

 Limpiar y Colocar el cubre hematímetro sobre la cámara.

 Desechar las primeras 3-5 gotas de la pipeta y llenar la cámara por uno de los bordes del cubrehematímetro.

 Se deja que el líquidos penetre lentamente entre la cuadrícula y el cubrehematímetro hasta que la plataforma de recuento este completamente cubierta de muestra.

 Dejar reposar de 3-5 minutos sobre la platina del microscopio.

 Con objetivo de 40x se encuentra los eritrocitos contenidos en 80 cuadros pequeños; uno central y cuatro de los extremos.

Cálculos:Si se considera que el retículo central tiene 400 cuadritos se realizará el siguiente cálculo.N x 200 x 10 x 400 = N x 10,00080N= número de eritrocitos contados200= factor de dilución10= corrección x altura de la cámaraValores de referencia:Hombres 4.5 x 106 – 5.5 x 106 mm3Mujeres 4.3 x 106 – 5.0 x 106 mm3

CUENTA LEUCOCITARIA

Objetivo: La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos.

Introducción: La leucopoyésis es un proceso que se lleva a cabo con

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