Cannabinoides

CONTROL DE CAMBIOS

1. Objetivo

Determinación y cuantificación del contenido total de Cannabinoides ácidos y no ácidos (CBD-A, CBG-A, CBN-A, THC-A CBD, CBG, CBN, THC) en matrices vegetales o productos derivados mediante cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC).

1. Alcance

La metodología es aplicable para la cuantificación del porcentaje másico de cannabinoides ácidos y no ácidos presente en hojas secas, resinas, extractos y productos derivados del cannabis.

La extracción de cannabinoides en las diferentes matrices se realiza utilizando un solvente polar (etanol y metanol) para posteriormente separar los componentes utilizando cromatografía líquida de alto desempeño y analizándolos con un detector ultravioleta de matriz de diodos.

• El límite de cuantificación del método: VERIFICAR LA INCERTIDUMBRE EN EL PUNTO MÁS BAJO

1. Discusión General

Se realizo pruebas con oleorresinas, extractos y hojas secas de cannabis donde se estableció que le método funciona correctamente.

1. Equipos y materiales

1. HPLC-DAD                

Marca: Aligent                Cód: E-LI009

1. Balanza analítica                        

Marca: Mettler Toledo        Cód: E-LI041                R:(0.0001-320) [g]        A: ± 0.0001 g

1. Micropipeta

Marca: Glassco                Cód: E-LI113                R: (10-1000) [μL]          A: ± 0.1 μL

1. Micropipeta

Marca: Glassco                Cód: E-LI113                R: (100-1000) [μL]        A: ± 1 μL

1. Plancha de calentamiento
2. Balón aforado

Marca: Pyrex                Código: E-LI108        Cap: 5 [mL]

1. Jeringuillas desechables – 3 mL
2.  Filtro para jeringuilla- PFTE – 0.45 μm
3. Viales y tapas para HPLC
4. Columna Cromatográfica Mediterránea SEA18  3 µm, 10x0.4 mm         Marca: Teknokroma

NOTA: Código según listado de equipos

1. Reactivos

1. Acetonitrilo – grado HPLC                        C2H3N
2. Etanol – grado HPLC                                C2H5OH
3. Metanol – grado HPLC                                CH3OH

NOTA: Todos los solventes utilizados como fase móvil son de grado analítico (HPLC)

1. Patrón de referencia o Material de referencia requeridos

Los estándares comerciales de CBD-A, CBG-A, CBN-A, Δ9THC-A CBD, CBG, CBN, Δ9THC poseen una solución de 1000 ug/ml disueltos en metanol

1. Preparación de las soluciones estándar de calibración

Para realizar la solución patrón que será utilizada durante la curva de calibración se procedió a colocar 50 uL de la estándar y aforar a 10 mL. De esta forma se obtendrá una solución patrón de 5 ug/mL

La solución patrón (5 ug/mL ) de cada cannabinoide, se filtra y coloca en un vial ámbar. Dicha solución de referencia permitirá realizar la curva de calibración másica en función del volumen de inyección.

La curva de calibración se realizó para 5 niveles realizando dos repeticiones por cada punto de calibración. Para cada volumen de inyección existe un método específico establecido en la Tabla 1  y 2

Nota: Una vez obtenida la solución estándar, utilice papel parafinado cubriendo los estándares y almacenar a temperaturas inferiores a -4ºC.

Tabla 1

Curva de calibración para los cannabinoides ácidos

Tabla 2

Curva de calibración para los cannabinoides no ácidos

1. Condiciones Ambientales

La temperatura de trabajo en el Laboratorio de Investigación de la Facultad de Ingeniería Química es entre 18º y 20º C, con una variación de ± 5º C. El rango de humedad del laboratorio es 45-50 %, considerándose ideal según la Guía G02 R00 del Servicio de Acreditación Ecuatoriano.

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