Cannabinoides
Enviado por Edwin Josue Tasiguano Sanguña • 15 de Noviembre de 2023 • Documentos de Investigación • 2.793 Palabras (12 Páginas) • 35 Visitas
[pic 1] | Determinación de Cannabinoides (CBD-A, CBG-A, CBN-A, THC-A CBD, CBG, CBN, THC) mediante HPLC-DAD | CÓDIGO: M-INV-01 |
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- Objetivo
Determinación y cuantificación del contenido total de Cannabinoides ácidos y no ácidos (CBD-A, CBG-A, CBN-A, THC-A CBD, CBG, CBN, THC) en matrices vegetales o productos derivados mediante cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC).
- Alcance
La metodología es aplicable para la cuantificación del porcentaje másico de cannabinoides ácidos y no ácidos presente en hojas secas, resinas, extractos y productos derivados del cannabis.
La extracción de cannabinoides en las diferentes matrices se realiza utilizando un solvente polar (etanol y metanol) para posteriormente separar los componentes utilizando cromatografía líquida de alto desempeño y analizándolos con un detector ultravioleta de matriz de diodos.
- El límite de cuantificación del método: VERIFICAR LA INCERTIDUMBRE EN EL PUNTO MÁS BAJO
- Discusión General
Se realizo pruebas con oleorresinas, extractos y hojas secas de cannabis donde se estableció que le método funciona correctamente.
- Equipos y materiales
- HPLC-DAD
Marca: Aligent Cód: E-LI009
- Balanza analítica
Marca: Mettler Toledo Cód: E-LI041 R:(0.0001-320) [g] A: ± 0.0001 g
- Micropipeta
Marca: Glassco Cód: E-LI113 R: (10-1000) [μL] A: ± 0.1 μL
- Micropipeta
Marca: Glassco Cód: E-LI113 R: (100-1000) [μL] A: ± 1 μL
- Plancha de calentamiento
- Balón aforado
Marca: Pyrex Código: E-LI108 Cap: 5 [mL]
- Jeringuillas desechables – 3 mL
- Filtro para jeringuilla- PFTE – 0.45 μm
- Viales y tapas para HPLC
- Columna Cromatográfica Mediterránea SEA18 3 µm, 10x0.4 mm Marca: Teknokroma
NOTA: Código según listado de equipos
- Reactivos
- Acetonitrilo – grado HPLC C2H3N
- Etanol – grado HPLC C2H5OH
- Metanol – grado HPLC CH3OH
NOTA: Todos los solventes utilizados como fase móvil son de grado analítico (HPLC)
- Patrón de referencia o Material de referencia requeridos
Los estándares comerciales de CBD-A, CBG-A, CBN-A, Δ9THC-A CBD, CBG, CBN, Δ9THC poseen una solución de 1000 ug/ml disueltos en metanol
- Preparación de las soluciones estándar de calibración
Para realizar la solución patrón que será utilizada durante la curva de calibración se procedió a colocar 50 uL de la estándar y aforar a 10 mL. De esta forma se obtendrá una solución patrón de 5 ug/mL
La solución patrón (5 ug/mL ) de cada cannabinoide, se filtra y coloca en un vial ámbar. Dicha solución de referencia permitirá realizar la curva de calibración másica en función del volumen de inyección.
La curva de calibración se realizó para 5 niveles realizando dos repeticiones por cada punto de calibración. Para cada volumen de inyección existe un método específico establecido en la Tabla 1 y 2
Nota: Una vez obtenida la solución estándar, utilice papel parafinado cubriendo los estándares y almacenar a temperaturas inferiores a -4ºC.
Tabla 1
Curva de calibración para los cannabinoides ácidos
Nivel calibración | Volumen inyección (µL) | Método | Concentración final (µg) | |||
CBG-A | CBD-A | CBN-A | Δ9THC-A | |||
1 | 5 | CANNABINOIDES 5 UL | 0.025 | 0.025 | 0.025 | 0.025 |
2 | 10 | CANNABINOIDES 10 UL | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
3 | 20 | CANNABINOIDES 20 UL | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
4 | 30 | CANNABINOIDES 30 UL | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
5 | 40 | CANNABINOIDES 40 UL | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
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