Caracteriza los tejidos fundamentales del cuerpo humano a partir de la estructura microscópica, clasificación y relaciones funcionales que guardan entre sí.

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE ENFERMERÍA

UNIDAD DE APRENDIZAJE: HISTOLOGIA BÁSICA

LICENCIATURA EN ENFERMERÍA PLAN 2012

MANUAL DE LABORATORIO

PRÁCTICA 1

MICROSCOPÍA Y TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

COMPETENCIAS:

Analiza y clasifica la función de las diferentes partes del microscopio.

Usa el microscopio óptico de campo claro para obtener imágenes claras, nítidas y bien contrastadas en los diferentes aumentos.

Determina el grado de magnificación de las imágenes.

Comprende la diferencia entre las imágenes obtenidas en el microscopio óptico y con el microscopio electrónico.

Identifica las principales técnicas de coloración para cortes histológicos que se manejaran en el curso.

INTRODUCCION:

MICROSCOPÍA

Por muchos años, no se tuvo conocimiento de los miles y millones de microorganismos que existen en todas partes hasta que (Anton Van Leeuwenhoek) inventó el microscopio y que éste a su vez fue perfeccionado pon Jansen. El microscopio se compone de tres sistemas principales. El mecánico, el óptico y el de iluminación.

Sistema mecánico. Esta parte mecánica está compuesta por el soporte o pie, columna o brazo, macrométrico, micrométrico, revolver, pinzas, platinas, etc.

Cada parte mecánica del microscopio tiene una determinada función. En su conjunto sostienen al sistema óptico y al sistema de iluminación además de contar con la estructura adecuada para permitir los movimientos necesarios para enfocar a la muestra que se quiere observar.

Sistema óptico. Es la parte del microscopio encargada de generar la imagen que llega al observador. El sistema óptico de un microscopio óptico se compone del ocular y de los objetivos. 

Ocular: el ocular de un microscopio se sitúa en la parte superior. El ocular aumenta la imagen proyectada por el objetivo. El poder de aumento del ocular va desde 5x a 20x. También se pueden encontrar oculares con distintas características especiales, por ejemplo, hay oculares que llevan grabado una regla micrométrica para medir el tamaño de las estructuras observadas al microscopio. Objetivos: el objetivo es la parte del microscopio encargado de la captación y aumento de la imagen. El objetivo es la parte del sistema óptico de un microscopio más cercana a la muestra. Hay diferentes tipos de objetivos, la lupa, los objetivos secos débil 10x y seco fuerte 40x y el objetivo de inmersión (100x).

Sistema de iluminación. El sistema de iluminación puede hacer uso de luz natural (solar), recogiendo la luz a través de un sistema de espejos, o puede utilizar un foco de luz artificial. Esta luz se dirige hacia la muestra a observar, la cual se sitúa entre la fuente de iluminación y el sistema óptico. En definitiva, el sistema de iluminación tiene por función dirigir la luz a la muestra, modificarla para que llegue de forma adecuada.

Propiedades del Microscopio:

• Resolución. También llamado a veces poder de separación, se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro.

En el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0.2 décimas de micra, y en el microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 angstrom.

• Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas.
• Aumento del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto.

Si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto.

Para calcular el aumento de un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 10X x 45X = 450X. Lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces.

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

Se define como técnicas histológicas al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.

A continuación, presentamos los fundamentos de dos técnicas de coloración usadas en este curso.

Técnica de coloración de Hematoxilina-Eosina.

Es una técnica topográfica en la que el colorante nuclear, primario y de naturaleza básica (alcalina) es la Hematoxilina que tiñe el núcleo y los sitios que presentan carga neta negativa. El colorante secundario (ácido) o de contraste es la Eosina que tiñe las estructuras de carga neta positiva.

Esta técnica se conoce como regresiva ya que primero se tiñe el tejido en exceso y posteriormente se decolora con un diferenciador que es el alcohol-ácido, este es el proceso crítico de la técnica ya que se retira el exceso de Hematoxilina que toma un color rosa por el pH ácido por lo que se hace necesario un cambio de pH con agua amoniacal la cual hace virar la tonalidad a morada o azul para después diferenciar con la Eosina.

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