Colesterol

Objetivos

Conocer los valores normales de colesterol en la sangre.

Conocer el mecanismo del cuerpo para metabolizar el colesterol y que está involucrado en este proceso.

Indicar la importancia del colesterol para el ser humano.

Determinar la concentración de colesterol de una muestra.

Señalar los factores que pueden interferir en el cálculo del colesterol.

Palabras claves:

Colesterol

Ácidos grasos

Quinoneimina

Determinación

Espectrofotometría

Resumen

Es conocida la relación existente entre elevados niveles de colesterol en sangre y el desarrollo de arteriosclerosis y enfermedades coronarias. El cálculo de los niveles de colesterol en sangre forma parte de los exámenes de prevención habituales que se realizan en la consulta Atención Primaria. En este laboratorio realizamos un ensayo enzimático para la determinación de colesterol mediante la utilización de un kit de determinación de colesterol, la técnica que utilizamos en esta experiencia es la espectrofotometría, dicha técnica se refiere al uso de la luz para medir las concentraciones de sustancias químicas, conociendo así los Intervalo de confianza (120-200 mg/dL) de colesterol, se podría considerar que la muestras de los estudiantes se encuentra entre los rangos normales.

Marco teórico

Algunos de los primeros métodos para efectuar pruebas de colesterol incluían la obtención de productos coloreados, haciendo reaccionar el colesterol con sustancias fuertemente ácidas. Dado que se descubrió que los ésteres de colesterol y el colesterol libre no producen cantidades equivalentes de color esto dio lugar a la adición de un paso de saponificación para transformar los ésteres de colesterol en colesterol libre. Actualmente se utilizan métodos más rápidos y seguros que utilizan enzimas como reactivos para las pruebas de colesterol.

Los métodos enzimáticos para el análisis de colesterol fueron ideados en los años 70 y desde entonces han reemplazado los métodos químicos casi completamente.

Los métodos enzimáticos se ven menos sujetos a posibles interferencias por sustancias no esterólicas que los métodos químicos. No obstante, no hay absoluta especificidad para el colesterol, dado que su oxidasa puede reaccionar también con otros estelores, que se sabe que están también presentes en el plasma, y con esteroles vegetales, presentes en concentraciones apreciables en la circulación en pacientes con *-sitosterolemia. El método atribuido a Flegg lleva a cabo el análisis en tres pasos; el grupo 3-OH del colesterol es oxidado y el agua oxigenada, que es uno de los productos de la reacción, se determina enzimáticamente:

Hidrólisis de los ésteres de colesterol mediante la colesterol esterasa (CE).

Colesterol esterificado CE Colesterol libre + ácido graso Oxidación del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO) para producir peróxido de hidrógeno.

Colesterol libre + O2 CO 4-Colestenona + H2O2

Oxidación de un cromógeno con el peróxido de hidrógeno en una reacción catalizada por la peroxidasa para producir un producto coloreado.

H2O2 + fenol +4- aminoantipirina peroxidasa quinoneimina + H2O

Con respecto a las enzimas que actúan en estas reacciones, se puede decir que:

La colesterol esterasa (CE) se encuentra presente en el jugo pancreatico y en el intestino, transforma los esteres del colesterol en colesterol y acido graso libre, y es precisamente en esta forma libre como es absorbido el colesterol por el intestino.

La colesterol oxidasa (CO) se encuentra en la vesicula biliar y el intestino y produce la oxidación del colesterol libre debido a que el organismo es incapaz de oxidar colesterol hasta dioxido de carbono por lo que solo puede excretarlo en la bilis donde parte del colesterol libre se convierte en ácidos. Salud al día. Análisis clínicos

Materiales

Material Imagen

Vasos químicos

Plancha

Micro pipeta

1.

Guantes

Kit para determinación de colesterol 1. 2. 3.

Tubos de extracción

Procedimiento

Resultados

Cuadro 1. Resultados de los niveles de colesterol de 3 estudiantes.

Muestra Colesterol (mg/dl) Absorbancia

M1 182.36 2.037

M2 124.44 1.390

M3 158.46 1.770

P 200 2234

Imagen 1. Suero obtenido mediante centrifugación.

Imagen 2. Muestras de sueros centrifugadas.

Imagen 3. Determinación de la concentración

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