Cromatografia Fina

Cromatografía en capa fina:

 Con ayuda de un capilar tomar una muestra del extracto líquido del tubo 3, aplicar 3 veces sobre la placa cromatográfica (fase estacionaria). Introducir la placa en la cámara para cromatografía, previamente saturada con la mezcla de elución respectiva (se recomienda emplear dos placas cromatográficas, cada una para una fase móvil diferente). Dejar eluir el solvente a través de la placa, hasta alcanzar alrededor de 0.5 mm del borde superior de la placa. Con ayuda de un depilador o pinza retirar la placa de la cámara, dejarla secar a temperatura ambiente y con ayuda de aspersor o atomizador asperjar con el revelador universal en campana de extracción según las indicaciones dadas más adelante. Como se indicó antes, si se cuentan con placas de vidrio o cromatofolios de 10 cm X 10 cm, se pueden aplicar hasta 8 muestras por placa, de forma que en una sola placa o cromatofolio se puedan aplicar y evaluar las muestras de varios grupos.

Nota: Para la revelación de la cromatografía se recomienda emplear reveladores químicos universales, los cuales permiten la identificación de diferentes tipos de metabolitos. Si el tutor lo desea podría utilizar también reveladores específicos. Cada revelador se emplea en una sola placa cromatográfica. A continuación se describe la forma de utilización de algunos reveladores universales y específicos y las pruebas positivas correspondientes.

Indicaciones reveladores químicos universales:

 GODÍN (revelador universal): humedecer o aspejar las placas cromatográficas, primero con la solución A y posteriormente con la solución B. Dejar secar y calentar la placa a 100ºC hasta aparición de manchas coloreadas a la luz visible. Para calentar la placa emplear estufa de aire circulante o sobre plancha de calentamiento cuidando que no se queme. Resultados: terpenoides: manchas de color violeta, rosada ó azul; flavonoides, xantonas, naftoquinonas: manchas amarillas; irioides: manchas cafés.  OLEUM (revelador universal): La forma de aspersión y los resultados observados son muy similares a los obtenidos con GODÍN.

Indicaciones reveladores químicos específicos (si el tutor los quiere emlplear):

 DRAGENDORFF para cromatografía (detección de alcaloides): humedecer o asperjar las placas cromatográficas, dejar secar. Observar la aparición de manchas naranja a la luz visible.  BORNTRÄGER (detección de antraquinonas y cumarinas): Humedecer o asperjar las placas cromatográficas, dejar secar. Observar la aparición de manchas al visible y a 365 nm. Calentar a 100ºC y observar de nuevo. Antraquinonas: manchas rojas; cumarinas: manchas azules a luz UV-365 nm.

A continuación se presenta un esquema guía para la comprensión del proceso de cromatografía en capa

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