Cromatografia

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PROGRAMA DE BIOLOGIA

BIOLOGÍA GENERAL

PRACTICAS DE LABORATORIO: INTERCAMBIO DE MATERIA ENTRE LA CÉLULA Y EL MEDIO: ÓSMOSIS Y DIÁLISIS

2. OBJETIVOS

- Discutir cómo la pared celular afecta el comportamiento osmótico de la célula.

- Determinar el efecto de los factores ambientales sobre la permeabilidad celular.

- Comprobar los fenómenos de diálisis en una membrana animal.

3. MATERIALES

- Biólogicos: Elodea sp, remolacha congelada y al medio ambiente (Beta vulgaris), vejiga de cerdo, res, o membrana de hígado, cebolla de bulbo (Allium cepa sp).

- Reactivos: Solución salina y de sacarosa 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 y 0.5M., AgNO3 0.2M, lugol, solución de almidón y de sal al 10%, HNO3 6M., agua destilada.

- Equipos: microscopio, nevera

- Otros: soporte universal, llave para embudo, beaker de 250ml, embudo, pipeta, portaobjetos, laminillas, 3 tubos de ensayo, gradilla, pinzas para tubo de ensayo, mechero, gotero, termómetro, bisturí o cuchillas de afeitar, bandas de caucho, papel celofán (medio pliego).

4. METODOLOGÍA

4.1 MONTAJE PARA DIÁLISIS (FIGURA 1)

En el interior de un embudo de vidrio, asegure la vejiga, según sea el caso con las bandas de caucho, vierta una mezcla de solución de almidón y sal al 10%. Evite los escapes de la solución a través de la membrana. Luego introduzca el embudo en un vaso de precipitado con agua destilada y asegure el tubo del embudo al soporte universal con la llave. A la media hora tome dos muestras de 2 ml. del líquido externo a la membrana y páselos a dos tubos de ensayo para detectar la presencia de almidón y sal. Para la detección de la sal agregue 1ml de HNO3 a uno de los tubos de ensayo y se hierve el contenido por 2 min. Y una vez frío se agregan 3 ó 4 gotas de AgNO3 0.2M. Un precipitado blanco es prueba positiva de la presencia de iones cloruro. Para la detección del almidón, agregue unas gotas de lugol en el segundo tubo. La presencia de una coloración azul-violeta es prueba positiva para almidones.

Figura 1. Montaje para diálisis

- Efecto de los factores ambientales sobre la permeabilidad celular

Corte varios trozos de remolacha de aproximadamente 1 cm3, lávelos en un vaso con agua para remover el pigmento hasta que deje de salir pigmento y proceda de la siguiente manera:

• Tubo #1: coloque 3 o 4 bloques de remolacha, adicione 2 ml. De agua destilada hasta cubrirlos por completo y caliéntelo controlando la temperatura con un termómetro hasta el momento hasta que comience a salir pigmento

• Tubo #2: coloque igual cantidad de remolacha pero congelada y cúbralo con agua destilada.

• Tubo #3: deje los bloques de remolacha en 2 ml de agua destilada al medio ambiente.

Después de 10 min. Registre los cambios producidos en cada tubo y analice que efecto produce el calentamiento y la congelación sobre la membrana de la remolacha.

- Comportamiento de la célula a diferentes concentraciones de soluto

Sobre la lámina portaobjetos, en el lado izquierdo, coloque una gota de solución de sacarosa al 0.1M y sobre ésta una hoja de elodea o cebolla. Luego cubra el montaje con una laminilla. Al lado derecho de la misma lámina coloque una gota de agua de la llave y otra hoja de elodea de tamaño semejante a la utilizada en el tratamiento anterior (control). No permita que se sequen los montajes. Observe al microscopio 20 células preferiblemente las ubicadas en el ápice de la hoja, determine si se presenta plasmolisis, registre los cambios y anote el tiempo transcurrido entre el montaje de la preparación y la iniciación de la plasmolisis. Recuerde que se considera que

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