Cromatografia

Cromatografía en columna

Cromatografía de liquidos

Método físico de separación

La muestra se distribuye entre dos fases

Fase estacionaria: sólido o líquido

Fase móvil: líquido o mezcla de líquidos

Requisitos de la muestra

Soluble en la fase móvil

“Limpia”

No debe reaccionar con ningún componente del sistema cromatográfico

Proceso de la cromatografía de liquidos

En esta, un liquido (fase móvil) circula en intimo contacto con un solido u otro liquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de sustancias (analitos) en la corriente de la fase móvil, cada analito avanzara a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad por cada una de las fases

Polaridad

Entre más polar sea un compuesto, más fuertemente se adsorbe en la fase estacionaria, por lo que su migración a lo largo de ella es menor, siendo eluído (arrastrado) más lentamente por la fase móvil, que los compuestos menos polares.

Finalidad del proceso

Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografía. Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarán más despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarán a mayor velocidad

En general se dice que la separación en la cromatografía se basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase móvil o la fase estacionaria.

Preparación de la columna

 Se emplean columnas verticales de vidrio cerrada en su parte inferior con una llave que permita la regulación del flujo de la fase móvil. (Bureta)

 Las columnas se rellenan con un adsorbente, como alúmina o gel de sílice (fase estacionaria)

 Se moja con el disolvente que se vaya a emplear en el proceso cromatográfico.

 En la parte superior de la columna se pone la disolución de la mezcla a separar y a continuación un depósito que contenga el eluyente (fase móvil) que se va a utilizar en la separación.

 Se abre la llave inferior de manera que el eluyente comience a bajar por la columna

 Se colocan recipientes para recibir los volúmenes eluidos

Consideraciones

 Se puede sustituir la columna por una pipeta Pasteur (microescala)

 El adsorbente se sostiene en un disco de vidrio poroso o un tapón de algodón o lana de vidrio cubierto con una capa de arena para retener partículas finas

 Arriba del adsorbente tambien se coloca una pequeña capa de arena para prevenir que la parte superior del adsorbente sea alternada.

 Nunca permitir que el nivel de disolvente baje mas alla de la superficie de la fase estacionaria ya que se puede agrietar o generar burbujas

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