Cuantificación De Clorofila

Se comenzó por lavar las hojas de acelgas al chorro del agua corriente, cuidando que no quedaran residuos de tierra o animales en éstas. Posteriormente las hojas fueron colocadas dentro de una bolsa obscura sobre hielos para retrasar su oxidación. Mientras éstas se enfriaban la balanza (vernier) fue calibrada para que fuera posible pesar después los 30gr de hojas que se necesitaban.

Las hojas fueron desnervadas ya que únicamente se utilizó el tejido. Ya que fue separada la materia necesaria de las hojas, éstas fueron pesadas en dos tomos de 15gr cada uno en la balanza vernier ya que la charola de ésta es muy pequeña y no cupieron los 30gr en una sola presentación. Mientras tanto el mortero fue puesto en enfriamiento sobre los hielos dentro de una palangana para que mantuviera la mezcla fría. Una vez pesados lo primeros 15 gr de hojas éstos fueron vertidos en el mortero y se le agregaron 30 ml de NaCl 0.35M y 5 ml de solución amortiguadora; se programó un cronómetro para que contara 4 minutos desde que se empezó a moler la mezcla para no rebasar los cuatro minutos. Una vez transcurrido este tiempo la mezcla fue filtrada con cuatro gasas sobre un vaso de precipitados para obtener el líquido y terminando la filtración se hizo el mismo procedimiento con los otros 15gr de hojas y se obtuvieron 75 ml de solución en total y fueron repartidos en 7 tubos de ensaye con una pipeta de 10 ml dejando 5ml en cada tubo y éstos fueron puestos en el hielo.

Para balancear en pares los tubos fue calibrada previamente la balanza granataria de dos platos. Una vez que calibrados los tubos fueron colocados dentro de dos camisas limpias y secas y se pusieron en balance. Para no perder los pares equilibrados cada tubo fue etiquetado con un número para colocarlos en la centrífuga de una manera simétrica. Después de acomodarlos dentro de la centrífuga comenzó a girar la perilla lentamente para que la punta del remolino en el tacómetro llegó hasta la línea 1 que son 500rpm y hasta que la punta tocó la línea se comenzó a contar el tiempo para que se centrifugara ésta velocidad durante tres minutos, cuando el cronómetro marcó la finalización del tiempo la perilla fue girada en sentido contrario para que la revolución fuera disminuyendo paulatinamente con el propósito de no dañas la centrífuga, una vez que se detuvo por completo fue abierta para sacar los tubos con la solución, pudo observarse que en la punta del tubo se había acumulado el sedimento verde, separado del líquido.

Se decantó una de las muestras para tomar una porción del sedimento con la pipeta vernier y ésta fue puesta sobre un porta objetos para observarlo en el microscopio; la muestra fue enfocada primero con el objetivo de 10x y para una mejor resolución de imagen fue observada con el objetivo de 40x y con éste se alcanzó a ver movimiento dentro de la muestra.

El sobrenadante fue recuperado y repartido nuevamente en cuatro tubos de ensaye y éstos fueron balanceados dentro de sus respectivas camisas con la balanza granataria de dos platos utilizando una pipeta de 1 ml; una vez balanceados fueron metidos en la centrífuga de manera simétrica y ésta vez la perilla fue girada hasta que la punta del remolino en el tacómetro marcaro hasta la línea 6 que son 3000rpm y el cronómetro se programó a diez minutos, hubo un momento en que la punta del tacómetro bajaba rebasando la línea así que un integrante del equipo se dedicó a regular la velocidad durante ese tiempo. Al terminar los diez minutos los tubos fueron expulsados y se decantó el sobrenadante, ésta vez desechándolo y conservando únicamente la pastilla, a cada una se le fueron agregados 2 ml de NaCl 0.35M con una pipeta de 1ml y la muestra fue agitada

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