DILUCIONES

DILUCIONES

Si se sospecha que una muestra tiene una gran cantidad de microorganismos por mL o gm, la muestra se diluye. Al diluir lamuestra antes de hacer la prueba, se evita que las placas tengan exceso de colonias, permitiendo obtener diluciones con un número de colonias entre 25 y 250 CFU/ml o gm. El plan de dilución que más frecuentemente se utiliza envuelve diluir la muestra por un factor de 10. La muestra se diluye con una solución salina estéril, 0.85% NaCl of 0.1% peptona. Usualmente en este laboratorio se utilizan botellas de dilución con un volumen de 90 ó 99 ml.

1. La muestra ya sea sólida o líquida se considera que tiene un factor de dilución de 100 ó 1 (no-diluída).

2. Si el diluyente tiene 90 ml de solución estéril, para hacer una dilución 1/10, transfiera 10 ml ó 10 gm al blanco. Esta es la dilución 10-1.

3. Continue haciendo las diluciones necesarias.

Para diluciones utilizando un volumen de 99 ml de diluyente, puede añadir 11 ml para hacer solución de 10-1 ó 1 ml para hacer dilución 10-2.

El mismo procedimiento aplica al poner la muestra en placa. Si se toma 1 ml de muestra del la dilución 10-3 y se añade agar, tienes la misma dilución en la placa que tienes en el tubo. Si transfieres 0.1 ml de la muestra de la botella de dilución y le viertes agar, has procedido a hacer una próxima dilución (0.1 ml de la dilución 10-3 en la placa se convierte en la dilución 10-4).

REPORTE DE RESULTADOS

Cuando se contabilizan las placas, es importante seguir las siguientes reglas. Debes incluir:

• Dos cifras significativas

• Factor de dilución

• CFU / ml ó CFU / gm

• Contaje estándar de placa (SPC) ó contaje estimado estándar de placa (ESPC)

SOLO SE REPORTA UN CONTAJE POR MUESTRA, NO POR DILUCION.

Cuando se calculan los resultador de placas en duplicado se reporta la media geométrica (promedio). En la práctica, se utiliza el promedio para reducir estadísticamente las muestras que se salen del centro así como para encontrar el contaje de placa promedio cuando se trabaja con un gran número de placas.

PLACAS NORMALES: CONTAJE ESTANDAR DE PLACAS (SPC)

Primero, anote la dilución de la placa que está contando. Luego cuente las colonias que aparecen en la placa. Anote los resultados de las placas que tengan entre 25 a 250 colonias. Incluya las colonias pequeñas cuanto reporte sus resultados. Para reportar los resultados, promedie los contajes de placas en duplicado. Ajuste para 2 cifras significativas. Incluya el factor de dilución y reporte como “CFU/gm ó CFU/ml” SPC.

Muestra Placa 100 10-1 10-2 Contaje reportado

Leche pausterizada A TNTC 243 22 2.4 x 103 CFU/ml SPC

B TNTC 236 18

En el ejemplo anterior, no puedes utilizar los resultados de la dilución 10-2 porque el número de colonias en una de las placas está fuera del rango 25-250. Sin embargo sería acceptable reportarlos como estimado (2.0 x 104 CFU/ml ESPC).

PLACAS CON MUCHAS COLONIAS: CONTAJE ESTIMADO DE PLACA ESTANDAR

Puedes estimar el contaje de varias formas. Si utilizas un contador de colonias, el sistema de rejillas divide la placa en 56 áreas iguales. Escoge un area representativa de la placa y haz un estimado contando por lo menos 6 cuadrados. Saca el promedio de los cuadrados y multiplica por el factor de dilución. De nuevo, promedia los

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