DNA Plasmidico

INTRODUCCIÓN

Los plásmidos son moléculas de DNA extra cromosómico, circular y generalmente de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies bacterianas y que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosómico. A diferencia de éste, los plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula, pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales, como los que confieren resistencia a antibióticos, a metales etc. Los plásmidos poseen un interés singular en Ingeniería Genética por ser uno de los sistemas vectores más sencillos de usar. Un vector de clonación es un sistema que permite introducir en una célula hospedadora un fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta célula hospedadora el vector se replica y expresa.

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa. La electroforesis se usa en la materia del ADN recombinante ya que nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separarlos diferentes resultantes de las variaciones del experimento del ADN recombinante.

La agarosa es un producto natural que forma una matriz inerte y no tóxica que supone una herramienta indispensable en gran cantidad de técnicas. Su uso más extendido es para construir geles que permitan separar moléculas de ADN mediante electroforesis, y es útil para fijar moléculas a su estructura como anticuerpos, antígenos y enzimas.

La Electroforesis a través de geles de agarosa es el método estándar para separar e identificar fragmentos de ADN.

OBJETIVOS

 Obtener DNA del plásmido puC18.

 Realizar una electroforesis en gel de agarosa del plásmido obtenido y discutir sobre las formas moleculares obtenidas.

RESULTADOS

DISCUSIONES

Para poder llevar a cabo el aislamiento del DNA plasmídico se tuvieron que emplear reactivos como la solución 1 que se basa en un tampón Tris pH 8 para la resuspensión de las células, la solución de lisis (Sol. 2) formada por SDS, y la solución 3 por acetato potásico pH 5,5 que permite la neutralización del lisado.

La electroforesis que se llevo a cabo esta basada en que las moléculas de ácidos nucleicos están cargadas negativamente (al pH y condiciones del tampón en el que se encuentran) y al someterlas a un campo eléctrico migran hacia el polo positivo de este a través del gel, a velocidades que dependen de sus tamaños: una molécula pequeña puede seguir su camino a través del gel más fácilmente que una molécula grande.

De acuerdo a la electroforesis obtenida y a la revelación en el transiluminador se pudo observar que las muestras (de izquierda a derecha) 5 y 8 se obtuvo de manera correcta el DNA plasmidico ya que corrió casi hasta el final y se obtuvo un buen grosor de las manchas de la electroforesis, lo que indica que obtuvo un DNA súper enrrollado, lo que quiere decir que no se rompió ninguna de las dos cadenas de el DNA. Recordando que la más rápida en correr seria la súper enrrollada debido a que es más fácil que pase por los poros del gel, le seguiría la lineal y por último la circula relajada. La muestra que nosotros realizamos (2) no corrió de manera correcta, se quedo en el inicio, el aislamiento no se obtuvo.

CONCLUSIONES

• Los plásmidos son moléculas de DNA extracromosómico, covalente cerrados y generalmente de tamaño pequeño que se encuentran en muchas especies bacterianas que se pueden replicar de manera independiente de DNA cromosómico.

• El DNA plasmidico que se obtuvo en la separación por medio de la electroforesis fue primeramente el de la forma

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