Deterinacion de hemoglobina
Enviado por brandoncamsal • 22 de Noviembre de 2015 • Prácticas o problemas • 829 Palabras (4 Páginas) • 70 Visitas
[pic 2]Objetivo:
Adquirir las competencias (conocimientos y habilidades) para calcular la cantidad de hemoglobina en sangre, a través del análisis de una muestra de esta y para determinar si reúne con los requerimientos mínimos para realizar una transfusión sanguínea exitosa.
Fundamento:
El reactivo de Drabkin contiene cianuro potásico y ferricianuro potásico.
La hemoglobina reacciona con el ferricianuro potásico, haciendo pasar el hierro de la hemoglobina del estado ferroso al férrico para formar metahemoglobina, la cual se combina con el cianuro potásico y se forma la cianometahemoglobina.
La Solución estable que se produce se examina por medio del espectrofotómetro, en el cual su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que está contenida en la sangre del paciente.
Generalidades:
La hemoglobina es una proteína que está presente en los glóbulos rojos en altas concentraciones y que da el color rojo característico a la sangre (Proteína globular). La hemoglobina transporta el oxígeno a los órganos de su cuerpo y los tejidos y transporta el dióxido de carbono de los órganos y tejidos de nuevo a los pulmones. La hemoglobina se produce en la medula ósea.
Esta proteína globular está constituida por cuatro subunidades proteicas. Cada subunidad, denominada cadena de hemoglobina, formada por una cadena polipeptídica denominada globina, que está unida de modo no covalente a un grupo hemo, formando así una cadena de hemoglobina.
El grupo hemo está formado por una porfirina que cuenta con un átomo de hierro que está unido a sus cuatro átomos de nitrógenos.[pic 3]
Material, equipo y reactivos:
- Equipo de venopunción
- 2 tubos de ensayo de 13 x 100 mm
- 1 pipeta de Shali
- Boquilla
- 1 pipeta graduada
- Reactivo de Drabkin
- Espectrofotómetro
- Pipeta inmunológica
- Perilla de 3 vías
- Agitador
- Gradilla
- Guantes[pic 4]
Técnica:
- Realizar una extracción sanguínea, esta deberá ser recolectada en un tubo con EDTA. [pic 5][pic 6]
- Colocar la muestra en el mezclador de tubos automático.
- Usando la pipeta inmunológica y la perilla de tres vías, agregar al tubo de ensayo de 13x100 exactamente 5 ml del Reactivo de Drabkin.[pic 7]
- Se traslada 0.02 ml (20 microlitros) de sangre entera, con el uso de la pipeta de Shali y la boquilla, al tubo de ensayo que contiene la solución de Drabkin, enjuagando la pipeta varias veces con el mismo. [pic 8]
- Tapar el tubo con papel parafilm y mezclar la dilución invirtiendo cinco veces el tubo. Se deja en reposo durante 10 minutos para permitir la formación de la cianometahemoglobina, la cual es estable por varias horas.
- Se ajusta la escala de longitud de onda del espectrofotómetro a 540 nm.[pic 9]
- Se emplea como blanco agua destilada o la solución diluyente. La luz que absorbe el diluyente a 540 nm es insignificante.[pic 10]
- Se configura el espectrofotómetro a 100 en la escala de transmitancia (T) y a 0 en la escala de absorbancia (A).
- Se vacía la solución en una de las celdas del espectrofotómetro o en caso de que este requiera de un blanco
- Leer la absorbancia del problema y calcular la concentración de hemoglobina en la curva de calibración o mediante el factor correspondiente.
*Ya que, como se mencionó anteriormente, la coloración del producto obtenido es directamente proporcional a la concentración de la hemoglobina presente, se puede obtenerse la concentración de la hemoglobina del problema efectuando únicamente la lectura del estándar sin diluir y aplicando la siguiente fórmula:
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