Determinación de métodos de clonación

Cuando escuchamos la palabra "clon" nos vienen a la mente ovejas, cerdos, monos,… Sin embargo, la clonación es mucho más que eso. Un clon es una unidad genéticamente idéntica a la unidad de la que procede obtenida mediante reproducción asexual. El término engloba desde individuos completos (el primer animal clonado con éxito fue realizado en 1952 a partir del óvulo de una rana, y desde entonces se han conseguido clonar todo tipo de organismos) hasta fragmentos de ácidos nucleicos que se amplifican dentro de células vivas donde se replican en cultivo.

1. CLONACIÓN

1. CLONACIÓN MOLECULAR

Es un proceso similar a la PCR en el cual se amplifican las secuencias de ADN en el interior de células vivas. Presenta una serie de ventajas con respecto a la PCR:

• Permite replicar secuencias de mayor tamaño que en la PCR.
• Permite clonar el material genético de un organismo completo previamente fragmentado para crear genotecas.
• Es la base de la tecnología del ADN recombinante mediante la cual se obtienen organismos transgénicos o se diseña la terapia génica.
• Pueden obtenerse cantidades ilimitadas de secuencias mediante la inmortalización de líneas celulares.

1. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

La obtención de las secuencias de clonación se consigue mediante enzimas de restricción. Las enzimas de restricción son endonucleasas capaces de reconocer una secuencia específica de nucleótidos en el ADN y cortar en ese punto mediante la rotura de dos enlaces fosfodiéster de la doble hebra. El punto de la secuencia que sufre el corte se denomina sitio de restricción y cuenta con una serie de bases palindrómicas. La enzima de restricción EcoRI, una de las más utilizadas, reconoce y corta la secuencia GAATTC entre la G y la A.

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Los extremos de los fragmentos obtenidos mediante EcoRI son extremos cohesivos; otro tipo de enzimas de restricción dan como resultado extremos de fragmentos romos, como SmaI, que corta la secuencia CCCGGG entre la C y la G.

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