Determinación y Caracterización de la Estructura Comunitaria Microbiana del Lodo Activado
Enviado por Bea Cars • 21 de Octubre de 2017 • Síntesis • 813 Palabras (4 Páginas) • 116 Visitas
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Seminario de Tratamiento de Aguas
“Determinación y Caracterización de la Estructura Comunitaria
Microbiana del Lodo Activado”
22/10/2017
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Hoy en día, las plantas biológicas de tratamiento de aguas residuales son la aplicación biotecnológica más común en el mundo.
De las diversas alternativas de sistemas de tratamiento biológico que existen, los biorreactores convencionales de lodos activados (CAS) son, con mucho, la tecnología de tratamiento secundario más utilizada.
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Métodos basados en el análisis de diversos biomarcadores y 16S rRNA genes (rDNA) se han utilizado para caracterizar y monitorear las comunidades microbianas en diversos sistemas ecológicos.
El biomarcador “firma” de las muestras ambientales pueden ser estadísticamente analizados y aplicados para diferenciar los perfiles de la comunidad.
Métodos basados en 16S rDNA puede proporcionar más información sobre la estructura filogenética de las comunidades microbianas que el método de biomarcador.
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Con un contenido de fosfato del 11,8%, la comunidad fue predominada por organismos en forma de varilla que acumulaban polifosfato y PHA (Polihidroxialcanoato), mientras que a un contenido de 1,8% P la comunidad estaba dominada por cocos acumuladores de PHA que ni acumulaban polifosfato ni tomaban fosfato aeróbicamente cuando se proporcionaban
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La hipótesis inicial fue que las bacterias acumuladoras de polifosfato constituirían una fracción predominante de la población bacteriana en un lodo con contenido de fosfato del 11,8%, y al alterar el contenido de fosfato del lodo al 1,8%, podrían diferenciarse fácilmente de las bacterias acumuladoras no polifosfato utilizando el biomarcador y Enfoques de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante.
Métodos[pic 6]
Se usaron tres reactores secuenciales (A1, A2 y A3) con una mezcla de acetato y peptona como fuentes de carbono en condiciones anaeróbicas y aeróbicas alternantes.
8 rondas
50 minutos fase aerobia 80 minutos fase anaerobia
50 minutos fase de sedimento
Carga orgánica 0,38 – 0,88 kg/cm2 Tercer tiempo de residencia pH 7 – 8 Contenido de fosfato 1,8 – 14 %
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Análisis de biomarcadores quimiotaxonómicos[pic 8][pic 9]
las quinonas respiratorias se extrajeron con una mezcla de cloroformo: metanol, que se purificó por cromatografía de capa fina y se analizó cualitativamente mediante HPLC
Amplificación por PCR y aislamiento del ADN
Preparación de ADN[pic 10][pic 11]
1X tampón de PCR (TrisAcetatoEDTA)
200 μM de dNTP 1,5 mM de MgCl2
0,1 μM de cada cebador de bucle (968FGC y 1392R) 5% de DMSO (dimetilsulfóxido)
2,5 U de Taq DNA polimerasa en un volumen final de 100 Ml.
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Electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante
La amplificación del ADN se verificó mediante electroforesis de 2 ml del producto de PCR sobre gelosa al 1% en tampón TAE 1X (Trisacetato 20 mM, pH 7,4, acetato sódico 10 mM, EDTA 0,5 mM).
Los fragmentos de ADN se visualizaron mediante tinción con plata.
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Aislamiento, clonación y secuenciación
Se determinaron secuencias de ácidos nucléicos desoxirribosa de fragmentos específicos en los geles de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante. El fragmento se escindió del gel con una cuchilla de afeitar y el ADN se eluyó durante la noche en 100 l de tampón de TAE.
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Análisis filogenéticos
Las secuencias de ADN parcial obtenidas en este estudio se compararon con secuencias de ARNr 16S disponibles en Gen Bank utilizando el programa BLAST de NCBI.
Un árbol filogenético se construyó a partir de la matriz de
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