ENSAYO BACTERIAS TINCION DE GRAM

PALABRAS CLAVES:

• Bacterias

• Tinción de Gram

• Eubacteria

• Pared celular

• Gram positivas

• Gram negativas

RESÚMEN PROCEDIMIENTO:

• Materiales.

• Microscopio.

• Mechero.

• Portaobjetos.

• Cubreobjetos.

• Asa de platino (asa microbiológica) o una pipeta Pasteur.

• Frasco lavador.

• Solución de azul de metileno al 1%

• Solución de Cristal violeta.

• Solución de lugol.

• Solución de Alcohol-acetona.

• Solución de safranina.

• Pinzas para portaobjetos.

• Yogurt natural.

MARCO TEORICO:

Las bacterias son organismos unicelulares microscópicos, sin núcleo ni clorofila, que pueden presentarse desnudas o con una cápsula gelatinosa, aisladas o en grupos y que pueden tener cilios o flagelos. La bacteria es el más simple y abundante de los organismos y puede vivir en tierra, agua, materia orgánica o en plantas y animales.

Tienen una gran importancia en la naturaleza, pues están presentes en los ciclos naturales del nitrógeno, del carbono, del fósforo, etc. y pueden transformar sustancias orgánicas en inorgánicas y viceversa.

Son también muy importantes en las fermentaciones aprovechadas por la industria y en la producción de antibióticos. Desempeñan un factor importante en la destrucción de plantas y animales muertos. En efecto, la vida en nuestro planeta no existiría sin bacterias, las cuales permiten muchas de las funciones esenciales de los ecosistemas. Una bacteria de tamaño típico es tan pequeña que es completamente invisible a la vista.

Las bacterias son muy importantes para el ser humano, tanto para bien como para mal, debido a sus efectos químicos y al rol que juegan en diseminar enfermedades.

Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su núcleo no está rodeado por una membrana y consiste de una sola molécula de ADN cuya división es no-mitótica.

En su efecto beneficioso, algunas bacterias producen antibióticos tales como estreptomicina capaces de curar enfermedades.

Análogamente, las bacterias son muy importantes ya que convierten nitrógeno en una forma útil por ciertas raíces de plantas o proveen el gusto intenso en yogurt.

Las bacterias se usan en la producción de ácido acético y vinagre, varios aminoácidos y enzimas, y especialmente en la fermentación de lactosa a ácido láctico, la cual coagula las proteínas de la leche, y se usan en la fabricación de casi todos los quesos, yogurt y productos similares.

Ellas también ayudan a la descomposición de la materia orgánica muerta. Actualmente, los métodos de la ingeniería genética son usados para mejorar los tipos de bacterias con fines comerciales y muestran una gran promesa futura.

En cosméticos, muchos de los activos, tales como proteínas y péptidos de bajo peso molecular, ingredientes antiarrugas y antioxidantes, están siendo creados con el uso de tipos específicos mejorados de bacterias.

La mayoría de las bacterias pueden clasificarse en tres categorías de acuerdo a su respuesta al oxígeno gaseoso.

La bacteria aerobia crece en la presencia de oxígeno y lo requiere para su continuo crecimiento y existencia.

Otras bacterias son anaerobias, y no pueden tolerar el oxígeno gaseoso.

El tercer grupo es el anaerobio facultativo, el cual prefiere crecer en presencia de oxígeno, aunque puede hacerlo sin él.

Morfología y estructura

Las bacterias son microorganismos procariontes (no poseen membrana nuclear por lo que su ADN está libre en la célula) de organización muy sencilla. Pertenecen al reino Protista.

La célula bacteriana consta de:

Citoplasma (todas son citoplasmáticas). Presenta un aspecto viscoso, y en su zona central aparece un nucleoide que contiene la mayor parte del ADN bacteriano, y en algunas bacterias aparecen fragmentos circulares de ADN con información genética, dispersos por el citoplasma: son los plasmidos.

La membrana plasmática presenta invaginaciones, que son los mesosomas, donde se encuentran enzimas que intervienen en la síntesis de ATP, y los pigmentos fotosintéticos en el caso de bacterias fotosintéticas.

En el citoplasma se encuentran inclusiones de diversa naturaleza química.

Alimentación

El éxito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metabólica. Todos los mecanismos posibles de obtención de materia y energía podemos encontrarlos en las bacterias.

Según la fuente de carbono que utilizan, los seres vivos se dividen en autótrofos, cuya principal fuente de carbono es el CO2, yheterótrofos cuando su fuente de carbono es materia orgánica.

Por otra parte según la fuente de energía, los organismos o seres vivos pueden ser fotótrofos, cuya principal fuente de energía es la luz, y quimiótrofos, cuya fuente de energía es un compuesto químico que se oxida.

1. Las bacterias quimioheterótrofas, utilizan un compuesto químico como fuente de carbono, y a su vez, este mismo compuesto es la fuente de energía. La mayor parte de las bacterias cultivadas en laboratorios y las bacterias patógenas son de este grupo.

2. Las bacterias quimioautótrofas, utilizan compuestos inorgánicos reducidos como fuente de energía y el CO2 como fuente de carbono. Como, por ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus.

3. Las bacterias fotoautótrofas, utilizan la luz como fuente de energía y el CO2 como fuente de carbono. Bacterias purpúreas.

4. Las bacterias fotoheterótrofas, utilizan la luz como fuente de energía y biomoléculas como fuente de carbono.

Reproducción de las bacterias

Tras la duplicación del ADN, que está dirigida por la ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias.

Pero además de este tipo de reproducción asexual, las bacterias poseen unos mecanismos de reproducción sexual o parasexual, mediante los cuales se intercambian fragmentos de ADN.

Esta reproducción sexual o parasexual, puede realizarse por transformación, por conjugación o por transducción.

1.- TRANSFORMACIÓN: Consiste en el intercambio genético producido cuando una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive.

A continuación ver esquema.

2.- CONJUGACIÓN: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a través de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La bacteria que se llama F+ posee un plasmido, además del cromosoma bacteriano.

Se puede ver en el esquema siguiente:

3.- TRANSDUCCIÓN: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra se realiza a través de un virus bacteriófago, que se comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias.

PROCEDIMIENTO:

Procedimiento Tinción de Gram

Limpiar y secar portaobjetos

Tome una pequeña muestra de una colonia

Realice un extendido de la muestra en una gota de agua destilada que ya se encuentra en el portaobjetos.

Pase rápida pero suavemente la placa cerca de la llama una par de veces. Dejar secar a temperatura ambiente

Añadir 1 gota de cristal violeta a la preparación, hasta que se cubra por completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto. lavar la preparación con abundante agua

Agregar 1 gota de solución de lugol a la preparación y dejar actuar 1 minuto. Transcurrido el tiempo, lavar con abundante agua

Con cuidado, añadir gota a gota el alcohol-acetona lavando la preparación durante 20-30 segundos

Añadir el colorante de contraste, safranina (1 gota) y dejar actuar durante 1 minuto. Lavar con abundante agua

Dejar secar a temperatura ambiente y observar al microscopio. Iniciando con el menor objetivo

Procedimiento Bacterias del yogurt

Limpiar bien un portaobjetos

coloca una gota de agua destilada sobre el portaobjetos

Esterilizar el asa microbiológica a la llama del mechero calentándola hasta que se ponga al rojo vivo

Tomar una pequeña cantidad de yogurt y colócala sobre la gota de agua destilada, a continuación extiende suavemente la gota con el material sobre toda la superficie del porta.

Pasar el porta objetos suavemente sobre la llama del mechero, por la cara opuesta a la de la extensión, hasta que se seque el material, procurando que el calor no sea excesivo.

Coloca el porta, en el soporte y cúbrelo con azul de metileno se deja durante 3-5 minutos

Lava la preparación con agua destilada para arrastrar el exceso de colorante y sécala con papel o al aire

PROCEDIMIENTO

• Cogemos una parte de la colonia y la esparcimos en el portaobjetos con el asa suavemente dejando que la muestra quede uniforme aplicándole una gota de agua destilada, de esta forma cogemos el portaobjetos y lo pasamos suavemente en el mechero hasta que esta se vea seca.

• Aplicamos

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