Ensayo sobre Tincion de gram

UNIVERSIDAD AUTÓNIMA[pic 1][pic 2]

 DEL ESTADO DE MORELOS (UAEM)
ESCUELA DE NUTRICIÓN.

TINCIÒN DE GRAM

Escamilla Uriostegui Itzel Ariana, García Alanís Aide Yazmín, Miranda Brito Amy Adaneth, Pérez Salgado Itzel, Velásquez Espinoza Raquel.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA.

DIANA RIVERA BAHENA.

07/10/15

RESUMEN: 

En la práctica TINCION DE GRAM, primero observamos en los cultivos que habíamos hecho con anterioridad las colonias que se formaron, hicimos un conteo rápido e identificamos sus distintas formas (cocos, bacilos, diplococos y espiroquetas). Luego comenzamos con la tinción de las muestras, primero realizamos un frotis fijado al calor, el frotis consiste en limpiar con alcohol el portaobjetos, y colocar en él una gotita de agua y con el asa dispersarla un poco, secar al aire y fijar al calor. Ya después agregar una gota de cristal violeta por un min., Enjuagamos los residuos con ayuda de un gotero y agua, agregamos el lugol (yodo), volvimos a enjuagar, pusimos unas gotas de decolorante, enjuagamos y por último agregamos safranina por un minuto, volvimos a enjuagar, secamos al aire y observamos, y así repetimos estos pasos con cada una de las muestras que realizamos.

CUERPO DEL INFORME:

La tinción diferencial requiere el uso de al menos 3 reactivos químicos que se aplican en secuencia a un frotis fijado por calor. El primer reactivo es llamado tinción primaria o colorante primario. Su función es impartir color a todas las células. Con el objetivo de establecer un contraste de color, el segundo reactivo usado es un agente decolorante, el cual puede decolorar la célula completa o solo parte de ella. El reactivo final, el colorante de contraste, le da a las células decoloradas un color que contrasta con el del colorante primario. El colorante de contraste no puede ser absorbido por células que no han perdido el colorante primario. De esta manera, tipos de células o sus estructuras se pueden distinguir unas de otras en función del colorante que es absorbido.

Tinción: consiste en aplicar una tintura a una sustancia o un tejido para que resulte más simple detectarlo y analizarlo.

INTRODUCCIÓN:

De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado conetanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) elcolorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.

DESARROLLO DEL INFORME:

MATERIALES Y REACTIVOS:

Materiales:

• Microscopio óptico
• Mechero
• Asa de siembra
• Portaobjetos
• Muestras bacterianas (anteriormente  sembradas)
• Bote de residuos

Reactivos:

• Safranina
• Decolorante
• Yodo-lugol
• Cristal violeta

Equipo:

• Microscopio

METODOLOGÍA

• Esterilización: Ya con el mechero conectado, tomamos el asa y la ponemos sobre el fuego a modo de esterilizar nuestra área de trabajo, los portaobjetos se limpiarán con alcohol para que de ésta menara los tengamos esterilizados.
• Toma de muestra: Se tomará el portaobjetos y se colocará una gota de agua destilada, después con el asa ya esterilizada tomamos una muestra de alguna colonia y posteriormente sobre el portaobjetos se extenderá a 1cm cuadrado aproximadamente sobre el portaobjetos. Se deja secar durante 1 min aproximadamente y se repetirá el paso anterior para esterilizar el asa y así se hará para esterilizar cada una de las colonias.
• Colocación de reactivos: Ya con la muestra seca se colocará una gota de azul de metileno y se dejará secar durante 1 min, con gotas de agua destilada se quitará el exceso del reactivo, posteriormente se colocará todo para dejarse secar y se repetirá el proceso para quitar el exceso, para que posteriormente se agregue safranina, la cual se dejará secar en aproximadamente 1 minuto y después se moverá el exceso.
  Objetivo: Terminando el paso anterior con cada una de las muestras, podemos colocar cada portaobjetos sobre el microscopio en busca de alguna bacteria.
• Se lograron obtener los resultados esperados, desde cómo aplicar los conocimientos previos sobre la preparación de diluciones decimales seriados y siembra por extensión en placa. Y esto dio lugar a obtener las muestras que se necesitaban para observar el tipo de población de MO que existían en un determinado medio de cultivo, así como lograr identificar y diferenciar una GRAM+ DE UNA GRAM-. Además de logró identificar  el tipo de estructura morfológica que tenían dichas poblaciones, y todo lo esto lo logramos observar desde un microscopio.

RESULTADOS[pic 3][pic 4][pic 5][pic 6][pic 7][pic 8]

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CONCLUSIÓN:

La operación que se necesita seguir para el análisis microbiológico, exige unas reglas de manipulación asépticas muy estrictas (como la proximidad de un mechero)  cuya finalidad es cuidarnos del medio de cultivo.
Así como la utilización de material y diluyente estéril, para evitar la contaminación exterior del alimento.

Y en efecto las disoluciones tienen la finalidad de obtener una distribución lo más uniforme posible de los microorganismos contenidos en la muestra destinada para el análisis, así como la preparación de diluciones decimales que tiene como objeto reducir el número de microorganismos por unidad y poder realizar recuentos microbianos posteriores.

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