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ESTANDARIZACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO


Enviado por   •  13 de Abril de 2019  •  Informes  •  462 Palabras (2 Páginas)  •  9 Visitas

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  1. Estandarización del medio de cultivo sólido para el aislamiento de cepas fúngicas in vitro.

En muchos trabajos con cultivos celulares vegetales (Mohammad, Mahfuja, Firoz y Yoeup, 2014;  Szopa y Ekiert, 2014) se ha utilizado el medio de Murashige y Skoog (1962) con éxito. Si bien no se han encontrado referencias que indiquen el uso de estas sales como base para elaboración de medios de cultivo in vitro de hongos, por analogía se usó esta formulación con la variante de exceptuar la añadidura de vitaminas y compuestos orgánicos que si contiene la fórmula original, con la finalidad de conminar a las cepas a usar como única fuente de carbono al aceite de palma que se le incluirá. La formulación de Murashige y Skoog modificada que se usó fue la siguiente:

Macronutrientes.

  • Ammonium nitrate (NH4NO3) 🡪 1,650 mg/l
  • Calcium chloride (CaCl2 · 2H2O) 🡪 440 mg/l
  • Magnesium sulphate (MgSO4 . 7H2O) 🡪 370 mg/l
  • Potassium phosphate (KH2PO4) 🡪 170 mg/l
  • Potassium nitrate (KNO3) 🡪 1,900 mg/l

Micronutrientes.

  • Boric acid (H3BO3) 🡪 6.2 mg/l
  • Cobalt chloride (CoCl2 · 6H2O) 🡪 0.025 mg/l
  • Cupric sulphate (CuSO4 · 5H2O) 🡪 0.025 mg/l
  • Ferrous sulphate (FeSO4 · 7H2O) 🡪 27.8 mg/l
  • Manganese sulphate (MnSO4 · 4H2O) 🡪 22.3 mg/l
  • Potassium iodide (KI) 🡪 0.83 mg/l
  • Sodium molybdate (Na2MoO4 · 2H2O) 🡪 0.25 mg/l
  • Zinc sulphate (ZnSO4·7H2O) 🡪 8.6 mg/l
  • Na2EDTA · 2H2O 🡪 37.2 mg/l

Para la elaboración de medios sólidos se agregó agar agar 13g/L, en base a lo sugerido para la elaboración de medios de cultivo estándares.

Para la estandarización se ensayó tres concentraciones de aceite de palma: 0,5%, 1,5% y 2,5%  de acuerdo a lo determinado en los muestreos piloto y lo sugerido por Rodríguez (2011). Todos los componentes del medio de cultivo se combinaron y se esterilizaron en autoclave a 120ºC/15min.

Para el medio líquido se eligió la mejor concentración de aceite de palma y se prescindió del agar – agar. El medio de comparación estándar fue el Papa Dextrosa Agar (PDA) en la formulación sugerida por el fabricante (Merck®).

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