Medios De Cultivo

“PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO”

Alejandra Llamuca

Laboratorio de Microbiología de Alimentos I

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÌA EN ALIMENTOS (FCIAL)

UNIVERSIDAD TÈCNICA DE AMBATO (UTA)

RESUMEN

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y medios de cultivo estériles. En microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, pero en la práctica se utilizó la aplicación de la autoclave y la estufa.

Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La composición de los medios de cultivo varía en función de: grupo microbiano que se pretende estudiar, complejidad química, estado físico, y aplicación.

INTRODUCCIÓN

Por su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquellos microorganismos que interfieren el estudio del microorganismo de interés. (Archundia,1997)

Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el Desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo Puede ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en Condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los Microorganismos es el cultivo. Un cultivo puro contiene un único tipo de Microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. (Lopez,2001)

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad. (Lopez,2001)

El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se disuelve completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C. De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

* Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo no tienen agar en su formulación.

* Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la

movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).

* Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar también se utilizan para la determinación de células viables (recuento en placas).

El objetivo principal de la práctica es aprender a esterilizar los materiales y soluciones que se serán usadas para la preparación de cultivos. Además eenvasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se les dará y relacionar la composición de los diversos medios de cultivo con sus características y aplicaciones. (Zambrano,2013)

MATERIALES Y MÉTODOS

Proceso Nº1: Esterilización de los materiales

Antes de empezar la esterilizaron se empezó preparando las soluciones de agar nutritivo y agar PDA además se llenó 9 ml de agua de llave o peptonada en cada uno de los tubos (25 tubos).

Se empezó la esterilización en donde se contó 30 cajas petris con fila de 10, estas mismas fueron envueltas en papel Karft o periódico, cubriéndolas muy bien y sellándolas con cinta masquin, el mismo procedimiento se realizó con la caja de puntas para las micropipetas, estas fueron colocadas en el autoclave (Model No. 25x) conjuntamente con las soluciones de agar nutritivo y agar PDA. En el caso del autoclave fue expuesto aproximadamente a 121ºC para saber que ya se encuentra esterilizado por completo se debe esperar a que la temperatura descienda aproximadamente unos 20 min y en el momento de sacarlo con guantes se debe llevar a la estufa (Distecnics) por tres horas.

Proceso Nº2: Preparación de medios de cultivo por medio solido

Se comenzó vertiendo (hasta que se cierre el circulo) dentro de la cámara de flujo laminar, en 5 cajas petris previamente rotuladas, 3 de ellas serán llenadas por agar nutritivo y 2 con agar PDA.

Se pesó 10 g del solido (tierra) y se mezcla con 90 ml de agua peptona da en donde se comienza a agitar aproximadamente por 30 min. Esta solución fue la 1x10-1 por lo que se siguió con la 1x10-2 se introduce en la solución 1x10-1 una micropipeta de 100 μl y se traspasa al tubo señalado con 1x10-2 el mismo procedimiento se realiza hasta llegar a al tubo 1x10-5 en donde la solución se encontrara con menos microorganismos.

En el siguiente paso se debe colocar 100 μl en la cajas petris según sea su rotulado en donde se empezara con la solución de 1x10-3 hasta la 1x10-5 en el caso del agar nutritivo y en el agar PDA de la solución 1x10-3 y 1x10-4. . Luego de este paso se debe dispersar con la ayuda del asa. Todo este procedimiento se realizara dentro de la cámara de flujo laminar (ISO 14644).

NOTA: antes de verter las soluciones se debe flamear el matraz y en el caso de las soluciones con el cultivo se debe flamear los tubos de ensayo antes que ingrese la micropipeta.

CALCULOS Y RESULTADOS

Tabla N°1. “Preparación del agar nutritivo”.

Sustancia Cantidad

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