MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVOS.

RESUMEN:

La práctica de laboratorio se realizó con el fin de poder observar e identificar con el microscopio microorganismos de diversas clases y adquirís destrezas de tinción. La práctica la realizamos así; en portaobjetos realizamos tinción de Gram (+ y -) y una con un coctel microbiano, tinciones de capsula por los métodos de Hiss y Nigrosina (indirectas) y por ultimo una tinción de esporas o Móller.

PALABRAS CLAVES:

INTRODUCCION:

En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos.1 En la valoración de las muestras, es trascendente el poder de resolución del microscopio, el cual se define como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. El poder de resolución de un objetivo es responsable de la calidad, claridad, detalles y fineza de la imagen, y depende de la longitud de onda (λ) del haz de luz utilizado y de la apertura numérica del objetivo empleado. Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado técnicas tintoriales que destacan las características morfológicas de los microorganismos.2 Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiología.3

Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes naturales, los cuales son extraídos de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.

• TINCION SIMPLE: Solo se aplica un colorante (morfología-agrupación)

o TINCIÓN DIRECTA: Hablamos de tinción directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo (colorea los microorganismos)

• TINCIÓN COMPUESTA: Consiste en la aplicación de 2 colorantes. Se utiliza para distinguir tipos de microorganismos.

o TINCIÓN INDIRECTA: Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente (colora el entorno)

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

MEDIO LÍQUIDO:

1. En un porta objeto limpio y desengrasado.

2. Tomar muestra con asa del medio líquido y colocar en el porta.

3. Esparcir.

4. Dejar secar a temperatura ambiente.

5. Fijar con la llama del mechero.

6. Teñir, dejar y observar.

MEDIO SOLIDO:

1. En un porta objeto limpio y desengrasado.

2. Colocar una gota de s/n salina estéril (0.85%) sobre el porta objeto.

3. Tocar la colonia con asa redonda.

4. Emulsiona (esparcir).

5. Dejar secar.

6. Observar en el microscopio.

TINCION DE GRAM

Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.4 Es una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.5

La tinción de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglucano de la pared bacteriana, posteriormente se coloca lugol el cual, sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por lo formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglucano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de Alcohol-Cetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gran negativas ya que esta es soluble a la acción de solventes orgánicos. Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.6

COLORACIÓN DE CÁPSULAS

La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir de polipéptidos, polímeros de glucosa u otros aminoazúcares que contienen nitrógeno, que después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a coloraciones especiales.

TINCION NEGATIVA

La tinción negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fi n de rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos.7

Este método es muy útil, aunque está limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la correcta identificación de forma nítida y detallada de los componentes de dichas

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