Medios De Cultivo

PRACTICA N°2 “PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO”

I. INTRODUCCION

En la presente práctica hablamos de la preparación de medios de cultivo de tejidos los cuales Constituyen un elemento fundamental para el cultivo in vitro de células, tejidos y órganos pues poseen nutrientes y/o sustancias para el óptimo desarrollo del material vegetal y su crecimiento; en este caso trabajaremos con “Murashige & Skoog” (MS), un medio que trabaja con diferentes explantes como medio de cultivo basal para un grupo importantes de plantas de interés para la alimentación y con fines ornamentales.

Este medio tiene como principal característica su estado físico: es un medio líquido que evita el re secamiento y así dura más de lo normal; aporta mayor cantidad de nutrientes al tejido y conforme va pasando el tiempo pueden añadírsele nutrientes, hormonas, etc manteniéndose estable.

II. MATERIALES Y METODOS

2.1. Material de vidrio:

-Baguetas.

-Balones, 500 mL.

-Frascos ámbar para almacenar soluciones.

-Frascos transparentes de cultivo.

Matraces, 250 mL.

-Pipetas, 1, 5, 10 mL.

-Probetas, 500 mL.

2.2. Reactivos:

-Formulación del medio MS.

-Phytagel.

-Sacarosa.

2.3. Otros:

-Espátula.

-Guantes de asbesto.

-Ligas.

-Papel aluminio.

-Picetas.

-Bolsas de polipropileno

2.4. Aparatos:

-Balanza analítica.

-Potenciómetro.

-Autoclave.

-Microondas.

2.5. Métodos:

Se esterilizo el material que usaríamos: frascos, recipientes de cultivo. Primero se los lavo con detergente, seguido de lavado con agua corriente y agua destilada y finalmente en autoclave.

Para la preparación del medio, primero hubo reconocimiento de los compuestos a necesitar y se procedió a hacer cálculos para preparar el medio.

Una vez realizados los cálculos, empezó a pesarse y diluirse los compuestos para obtener la cantidad deseada y se los deposito en un matraz de Erlenmeyer guardándolos así en un lugar seguro y fresco.

III. RESULTADOS

Como resultados, tenemos la masa y volumen a necesitar de cada compuesto para el medio de Murashige & Skoog (MS)

IV. CONCLUSIONES

4.1 El conocimiento de medios de cultivo es importante para obtener el crecimiento optimo y deseado de órganos, células y tejidos aislados. Así pues, tenemos que un medio de cultivo puede estar compuesto por vitaminas, nutrientes (micro y macro) adecuados para cada tipo de cultivo o especie. Una vez obtenido el cultivo se incuba bajo condiciones ambientales de luz, temperatura y humedad controladas, que junto con las fisicoquímicas y nutricionales conducen el desarrollo del explante hacia la formación de una masa celular amorfa denominada callo, o hacia la diferenciación en un tejido organizado que producirá órganos o embriones. Los callos obtenidos mediante este procedimiento pueden sub cultivarse para su mantenimiento y propagación o inducir su diferenciación para formar órganos (organogénesis), embriones (embriogénesis) o pasarse a un medio de cultivo líquido para obtener células y pequeños agregados en suspensión.

4.2 La preparación del medio de Murashige y Skoog es un medio que trabaja con diferentes explantes y su ventaja es que es un medio liquido el cual nos permite trabajar con el sin que este se reseque manteniéndose estable al agregar más componentes si es que hiciera falta.

Es un medio complejo pues consta de macronutrientes, micronutrientes, azucares, vitaminas y carbohidratos.

V. BIBLIOGRAFIA

http://www.ecured.cu/index.php/Medios_de_cultivo_para_la_propagaci%C3%B3n_in_vitro

Artículo “CULTIVO DE CELULAS Y TEJIDOS VEGETALES: FUENTE DE ALIMENTOS PARA EL FUTURO” Revista Digital Universitaria, Volumen 6 Numero 11, Noviembre de 2005. México.

Guía de prácticas de Biotecnología Vegetal, Ing. Biotecnológica. Ing. Córdova Cinthia, Mgter. Bardales Roxana

VI. ANEXOS

Cálculos para la preparación del medio Murashige & Skoog:

MACRONUTRIENTES

• Nitrato de Amonio

80.09 g 1000 mM 1000ml

X 1000 mM 100 ml

X = 8 g

1000 mM X = 20.6 mM x 2000ml

X = 41.2ml

• Nitrato de Potasio

101.09 g 1000 mM 1000ml

X 1000 mM 100 ml

X = 10.1 g

1000 mM X = 18.8 mM x 2000ml

X = 37.6ml

• Cloruro de Calcio

128 g 1000 mM 1000ml

X 100 mM 100 ml

X =1.2 8 g

100

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