EXTRACCION DE REVERASTROL

Que es  el  resveratrol es un compuesto natural que se produce normalmente como respuesta inmunitaria en las plantas tras una agresión o infección, que se acumula en la piel y en mayor proporción en la semilla de la uva roja, pasando por tanto al vino.

TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN Y PREPARATIVAS 16 Para la determinación de resveratrol, de acuerdo a la técnica que se vaya a utilizar, ya sea para identificar o cuantificar, se deben realizar ciertos pasos previos, es decir, una preparación de la muestra, que, dependiendo el caso, va a optimizar los resultados que se obtengan. De acuerdo a la gran mayoría de autores, como Lee y Rennaker (2007), las muestras deben ser filtradas a través de un filtro Millipore de 0,45 µm, pues es importante mencionar que las muestras se deben colocar en viales ámbar, ya que se debe proteger de la luz para no causar la isomerización, es decir, el paso de transresveratrol a cis-resveratrol. Posterior a esto, la muestra ya podría ser inyectada en el cromatógrafo (Lee y Rennaker, 2007). Debido a la especificidad de la detección de masas (MS), un pico de transresveratrol podría ser detectado después de una simple filtración y dilución, de acuerdo a lo que sería la preparación de la muestra (Young et al., 2016). Según un análisis realizado por Montero (2001), la mayoría de métodos que se emplean en la determinación de resveratrol, utilizan la extracción en fase sólida (SPE según sus siglas en inglés), tanto para cromatografía de masas (GC según sus siglas en inglés) como para cromatografía líquida de alta resolución (HPLC según sus siglas en inglés) con fase normal. Estos métodos combinan esta extracción con la derivatización con bistrimetilsilano-trifluoracetamida (BSTFA) para así poder realizar el análisis por GC, principalmente (Montero, 2001). Por otro lado, la inyección directa es aplicada en HPLC con fase reversa, lo que facilita también el estudio de otros polifenoles. Un 9 % del total requiere de métodos de filtración previos a la inyección directa en HPLC, ya sea trabajando en fase reversa o con fase normal, como en el ensayo realizado por Lee y Rennaker (2007); los filtros que más se utilizan son de poli(tetrafluoroetileno) (PTFE) de 0,45 µm (Lee y Rennaker, 2007). La extracción líquido-líquido seguido de derivatización podría llegar a representar alrededor del 20 % de los métodos químicos analíticos; este tipo de extracción se utiliza comúnmente 17 para aplicarlos con el análisis por cromatografía de gases acoplado a masas (Ertan, Vural y Kizilet, 2012). La derivatización es un proceso donde se da una transformación química irreversible, que en particular es la formación de complejos. Aquí se modifica químicamente el analito para detectarlo o separarlo con mayor facilidad. Si se analiza por HPLC, los productos se detectan fácilmente por su fuerte absorbancia en el UV a 360 nm (Harris, 2007). En la derivatización, un hidrógeno activo es reemplazado por grupo alquilsilil como por ejemplo el trimetilsilil (TMS); este agente dervatizante es capaz de derivatizar grupos –OH, de ácidos y alcoholes. Comparando con el compuesto de partida, los silil derivados son mucho más volátiles, menos polares, y más estables térmicamente, ideales para el análisis por GC (Pindado et al., 2006) Así también se suele utilizar métodos de micro extracción en fase sólida (SPME según sus siglas en inglés) y la extracción con fluido supercrítico (SFE según sus siglas en inglés), en lo que se refiere a polifenoles en general, donde adyacentemente se determinaría el resveratrol. Entre las razones principales para la utilización de la micro extracción mediante un sorbente empaquetado, está lograr una limpieza optima a la muestra, liberándola así de impurezas, ya que los compuestos que no están retenidos en el sorbente se eliminan de la muestra final, como muestra la Figura 4, de otro modo podrían aparecer como picos de interferencia en los cromatogramas de cromatografía líquida de alta resolución. Esta técnica puede ser eficaz para detectar y cuantificar adecuadamente el analito, ya que, si el analito se encuentra en niveles bajos de concentración en una muestra en particular, la micro extracción solucionaría la posterior identificación debido a la pre-concentración de sorbente empaquetado. De acuerdo a los estudios analizados en el presente trabajo, se utiliza hidruro de sílice como sorbente en los cartuchos de la micro extracción para la posterior preconcentración. Se sabe que los grupos silanol producen efectos indeseables en HPLC ya que el grupo Si-H en el empaquetado de la columna es relativamente no polar, lo que puede impartir diferencias en la hidrofobicidad entre los dos materiales. Estos 18 tipos de diferencias se traducen en ventajas para la eficiencia de extracción o en la capacidad de eliminar los contaminantes de la muestra (Young et al., 2016). Para la preparación de muestra referente al cis-resveratrol, se utiliza un estándar de trans-resveratrol en la mayoría de los casos y se somete a radiación UV artificial o a la luz del sol; después de 10 min de exposición, el 80 – 90 % de transresveratrol se convierte en cis-resveratrol (Romero-Perez et al., 1996) En cuanto a la preparación de muestra, también se puede decir que depende del tipo de muestra con la que se trabaja, un ejemplo que se puede utilizar es el vino tinto (Merlot de California), que fue únicamente diluido al 3:1 en etanol al 12 % en agua, y fue analizado de esta manera agregando un nivel conocido de transresveratrol (Stenerson, 2017). Según Montero (2001), al analizar y contrastar las diferentes técnicas de extracción, se han encontrado desventajas, expuestas en la Tabla 1 (Montero, 2001).

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