Extracción de Triptófano

Extracción de Triptófano:

Introducción:

Para poder entender los procedimientos realizados en el siguiente ensayo/trabajo/proyecto se debe tener un conocimiento previo de los siguientes conceptos:

Las proteínas: son las moléculas orgánicas más abundantes de las células ellas constituyen un 50 % de peso seco de las células animales y/o vegetales , estas están formadas por más de 20 tipos aminoácidos diferentes. La unión entre ellos puede producir una gran cantidad de variantes. Esta unión se produce por el llamado enlace peptídico, que se produce entre el grupo amino (-NH2) de un aminoácido y el grupo carboxilo (-COOH) de otro.

La extracción de estas macromoléculas comienza siempre con una ruptura celular o lisis, los métodos más utilizados se basan esencialmente en la homogeneización delos tejidos y la destrucción de los limites celulares por medios de diferentes procedimientos físicos y/o químicos.

Obteniendo así lo que se denomina extracto crudo el método que nosotros utilizaremos es la homogenización por método físico, tratamiento con solventes y/o detergentes.

A este extracto crudo se lo debe pasar luego por un proceso de precipitación salina:

Este proceso es una técnica donde se logra la precipitación de las proteínas mediante el aumento de la fuerza ionica del medio. Grandes cantidades de una sal agregadas a una solución de proteínas disminuye la interacción proteína / agua porque quita la capa de solvatación, predominando la interacción proteína-proteína y generando la precipitación de las mismas, comúnmente se utiliza sulfato de amonio (NH4)2SO4 para tal fin, a causa de su gran solubilidad y porque el ion sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas iónicas.

Hidrólisis enzimática: La hidrólisis enzimática es el proceso en el cual se utilizan enzimas para romper los enlaces peptídico de una proteína. Esto sucede debido a que las enzimas péptidasas o proteasas actúan como catalizador hidratando los enlaces peptídicos por medio de la siguiente reacción H-OH + R-R’ → R-H + R’-OH.

Esto se debe realizar en condiciones específicas para cada enzima, como la temperatura, el pH, el tiempo de reacción etc.

Los Aminoácidos: Son la pieza clave de las proteínas; estos están conformados por un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo radical (-R) el cual es diferente en cada tipo de aminoácido y da a cada aminoácidos distintas cualidades o propiedades. Estos distintos grupos dan una gran variación de cargas a su estructura y generan una propiedad llamada punto isoeléctrico (Pi), esto es, un valor de pH en el cual un aminoácido tiene un equilibrio entre las cargas de sus grupos funcionales. Cuando se tiene una solución de distintos aminoácidos, para su separación existe un método llamado fraccionamiento electroforético o electroforesis. Este utiliza la propiedad antes mencionada (Pi) para que estos aminoácidos en solución migren hacia dos nodos de cargas opuestas, quedando en solución solo los aminoácidos que no tienen carga porque el pH alcanzo su Pi.

Procedimientos:

Extracción de proteínas:

1) Colocar la cascara de banana en un mortero.

2) Colocar al mortero unas 10 gotas de detergente con un poco de agua.

3) Homogenizar con el vástago hasta disgregar lo máximo posible.

4) Separar en tubos de centrifuga y balancear.

5) Centrifugar 15 min a 14.000 rpm.

6) Extraer el sobrenadante con una micropipeta y colocar en un tubo de ensayo y taparlo.

Si se quiere guardar para continuar luego se debe guardar un una heladera o freezer.

Precipitación con Sulfato de amonio:

1) Realizar

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