Extrasion de un adn

Introducción

La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Objetivos

-Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.

- Observar la estructura fibrilar del ADN.

- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades químicas

- Aprender a hacerlo de manera correcta y responsable.

Desarrollo

• Extraccion de ADN por método comercial (Noche Buena)

Ventajas de kit comercial:

1. Rapido
2. Preciso Universal
3. Universal

Desventajas:

1. Costo Alto
2. Requiere capacitación
3. Se requieren aparatos específicos (ruptor especifico)

• Protocolo

Hay que pesar de 100 a 200 mg de tejido (vegetal en este caso) de los tubos del kit .

1. El tubo sirve para romper la molecula de ADN, la bolita de porcelana ayuda a amacerar,mi muestra fue la #4
2. Agregar 800 micro litros de solución CLS-VF y 200 micro litros PPS (se usa una puntilla por muestra)
3. Homogenizar por 40 segundos a la velocidad de 6 en el ruptor celular.
4. Ponerlo en la centrifuga de 5 a 10 minutos a temperatura 21° c y a 14,000 gravedades
5. Transferir el sobreladante (600 microlitros) a un tubo de micro-centriuga de 2mll con un volumen igual de solución bindilg matriz.
6. Mezclar en un vortex a velocidad durante 5 minutos.
7. Centrifugar durante 10 segundos y desechar el sobreladante y se escurre el liquido
8. Agregar 500 microlitros de la solución SEWSM suspender la pastilla con la puntilla.
9. Centrifugar durante un minuto a 14,000 gravedades y tirar el sobreladante.
10. Suspender el bindilg matriz en 100 microlitros de la solución SEWSM, incubar 5 minutos a 55” a baño maria.
11. Centrifugar por un minuto a 14,000 gravedades y transferir el DNA en un tubo limpio para ser almacenado a -20° c (se escurre el liquido).

Anexos

Anexo unas imágenes de el tubo del kit con la perla de porcelana que sirve para romper la celula, la centrifuga  y como quedo el tejido.[pic 1]

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