Fundamentos Microbiologia
Enviado por alexizbac3106 • 11 de Junio de 2014 • 1.409 Palabras (6 Páginas) • 322 Visitas
AGAR XLD
El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella.
FUNDAMENTO
La degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y sacarosa) genera la producción de ácido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es prácticamente fermentada por todas las enterobacterias con excepción de los microorganismos pertenecientes al género Shigella.
La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de los microorganismos pertenecientes al género Salmonella, ya que sin la lisina estos microorganismos rápidamente fermentan la xilosa produciendo la acidificación del medio y no se pueden diferenciar de otras especies no patógenas. Como la cantidad de este carbohidrato es limitada, una vez que estos microorganismos lo consumen, comienzan a utilizar la lisina lo cual produce la alcalinización del medio; este hecho se evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo. En el caso de los rmes lisina positiva, para prevenir la alcalización del medio por la utilización de la lisina, se incorpora en el medio un exceso de lactosa y sacarosa.
El medio también tiene la capacidad de detectar la producción de H2 a través del sistema indicador tiosufalto de sodio y citrato férrico amonio. Cuando el microorganismo produce H2S S se observan colonias con el centro negro. Los microorganismos no patógenos productores de H2S no descarboxilan la lisina; cuando están presentes estos microorganismos la reacción ácida producida por la utilización de los carbohidratos previene en ennegrecimiento de las colonias.
El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor de los microorganismos Gram positivos.
Agar Sangre: Medio de cultivo enriquecido que permite el desarrollo de todo tipo de bacterias tanto gram positivas como gram negativas, diferencial (por el tipo de hemolísis) , no selectivo.
La Placa Agar Sangre esta preparada con medio de cultivo en polvo de nombre Agar Base Sangre, tiene como ingredientes agar-agar. infusión músculo de corazón, peptona, cloruro de sodio;
El color del medio es ámbar claro una vez se halla agregado sangre un 5% o 10 % del volumen total , su color cambia a rojo cereza.
La sangre utilizada para preparar el medio es sangre de cordero, sangre humana ;según los resultados esperados se utiliza tambien sangre de caballo y de conejo, importante considerar que algunas bacterias varían el tipo de hemolisis de acuerdo a procedencia de la sangre.
El uso de este medio de cultivo se fundamenta en que la infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio base aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemólisis. El medio se prepara suspendiendo 40 grs de polvo en 1000 cc de agua destilada a punto de ebullición , disolver hasta obtener una solución homogénea, aplicar calor lentamente en constante agitación , no permitir la ebullición , de esta forma aseguramos que los nutrientes no se desnaturalicen. La reconstitución del medio se alcanza cuando el medio se visualiza transparente a trasluz. Llevar a autoclave a esterilizar a 121ºC a 1 atmósfera de presión por 15 minutos ( Mantener variable de temperatura constante).
Enfriar hasta 50º temperatura que se registra en la práctica cuando el dorso de la mano resiste el contacto con el matraz. Es importante que el medio no registre mayor temperatura para lograr conseguir agar sangre ( temperaturas elevadas generan agar chocolate). Agregar la sangre y homogeneizar.
Medir ph del medio en vaso de precipitado y asi evitar contaminación; el ph del medio a 25ºC debe registrar
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