PRACTICA DE FISIOLOGIA DE SANGRE
Enviado por SCOTT_FUCHS • 18 de Septiembre de 2018 • Prácticas o problemas • 1.670 Palabras (7 Páginas) • 220 Visitas
PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA SANGRE Y SISTEMA
INMUNE
Para realizar los diferentes experimentos de la práctica, sacaremos sangre venosa con anticoagulante EDTA a un alumno de cada grupo:
Experimento 1.- Determinación del hematocrito
El hematocrito (Hto) es la relación existente entre el volumen de eritrocitos y el volumen total de sangre, expresado como porcentaje. Está directamente relacionado con la concentración de hemoglobina. Un descenso del mismo es indicativo de anemia, mientras que el aumento lo es de poliglobulia.
Método:
A.- a la sangre con anticoagulante obtenida, introduciremos un tubo capilar. Al hacerlo, la sangre subirá por él por capilaridad.
B.- Sellamos uno de los extremos del tubo con plastilina para que haga de tope y no salga la sangre durante la centrifugación.
C.-- Colocaremos en la microcentrifuga por 5 minutos a 10,000 rpm
D.- Al finalizar la centrifugación, la muestra se habrá separado en dos fracciones: un sobrenadante (parte líquida que corresponde al plasma) y un precipitado en el fondo (que corresponde a las células de la sangre).
E.- Se medirá (con una tabla) la fracción del precipitado celular y se calculará así el porcentaje del hematocrito.
[pic 1]
Experimento 2.- DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
GENERALIDADES
La hemoglobina es una proteína pigmentada de color rojo transportadora de oxígeno que se
Encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrámero con dos pares de Cadenas polipeptídicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina Llamado grupo hemo, que a su vez contiene hierro.
Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxígeno amortiguador del pH. Las concentraciones de hemoglobina están influidas por variaciones fisiológicas como la edad, sexo, deshidratación, postura y altitud, y por procesos patológicos. Se encuentran valores patológicos en anemias y en policitemias.
La determinación de la concentración de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas más importantes en el diagnóstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de anemia son: alteración en la síntesis de los eritrocitos en la médula ósea, pérdidas de sangre excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre periférica.
MUESTRAS
Sangre capilar o venosa recogida mediante procedimientos estándar y con heparina o EDTA como anticoagulante. La hemoglobina en sangre es estable 6 días a 2-8º C.
PROCEDIMIENTO
1.- Pipetear en 3 tubos de ensayo:
BLANCO | ESTÁNDAR | MUESTRA | |
ESTÁNDAR | 50 uL | ||
MUESTRA DE SANGRE | 50 uL | ||
REACTIVO DE TRABAJO | 5 ml | 5 ml | 5ml |
2. Mezclar por inversión sin que forme espuma y dejar por 3 minutos a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la Muestra a 540 nm restando el Blanco
CÁLCULOS
La concentración de hemoglobina en la muestra se calcula a partir de la fórmula:
A Muestra
-------------- X Concentración estándar = hemoglobina en gr%
A Patrón
OJO.- Los valores varían de acuerdo a la edad, sexo, lugar de procedencia
Experimento 3.-Velocidad de Sedimentación globular
VSG es la precipitación de los eritrocitos (glóbulos rojos) en un tiempo determinado (1-hora), que se relaciona directamente con la tendencia de los glóbulos rojos hacia la formación de acúmulos (pilas de monedas) así como a la concentración plasmática de proteínas (globulinas y fibrinógeno)
Materiales. Sangre con anticoagulante
Método:
A.- En un tubo de velocidad de sedimentación, agregar con una pipeta Pasteur sangre hasta la marca 0.
B.- Fijar con plastilina en forma vertical en las mayólicas de la pared
C.- Dejar por espacio de una hora
D.- Leer la sedimentación en … mm/hora
Experimento 4.- Recuento de glóbulos blancos
Estas pruebas tienen por objeto determinar la concentración de los distintos tipos celulares presentes en la sangre. Leucopenias y leucocitosis en el de los glóbulos blancos.
Materiales.
Sangre con anticoagulante
Reactivo de Turk para contar glóbulos bancos (ácido acético al 2% en agua destilada + 1 gota de violeta)
Cámaras de neubawer con sus respectivas laminilla
4 Microscopios binoculares
Método:
A.- En un tubo de ensayo pequeño 13x75 agregar 380 ul de reactivo de Turk agregar 20 ul de sangre anti coagulada mezclar sin formar espuma, dejar por un minuto
B.- Cargar aproximadamente 5ul de la suspensión en la cámara neubawer
C.- Dejar en reposos por 2 minutos, llevar al microscopio y leer los cuadrantes grandes (L)
D.- El resultado dividir entre 2, agregar 2 ceros, se expresa en cel/mm3
Cámara de Neubawer
[pic 2]
Los valores se dan en células x mm3
Experimento 5.-Práctica Determinación del grupo sanguíneo: Materiales:
Sangre con anticoagulante
Placa de porcelana
Pipetas de plástico
Reactivos de grupos sanguíneos: anti A, anti B y anti D
Método:
1. Se realiza una extracción venosa
2. Ponemos una gota de anticuerpo A en la porta rotulada con la A, Otra gota de anticuerpo B en el porta B, una gota de anticuerpo Rh+ en el porta D.
3.* Agregamos una gota de sangre (con cuidado de no tocar la punta de la pipeta con el anticuerpo del porta) a cada anticuerpo y mezclamos.
4. Interpretamos los datos según la aglutinación de la sangre de los portas:
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