PREINFORME

PRACTICA No. 1 – Normas Generales de Bioseguridad

Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas

Esterilización, Desinfección y Manejo de Equipos de Laboratorio Propósito(s): Durante el trabajo del laboratorio de microbiología, se dan situaciones de potenciales riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos utilizados. Las Normas de Bioseguridad pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material peligroso. Objetivo(s): 1. Establecer normas y principios básicos de comportamiento en el laboratorio. 2. Aprender y utilizar los métodos de esterilización disponibles en el laboratorio. 3. Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de microbiología. Meta(s): Competencia(s)

Fundamentación Teórica El trabajo en el laboratorio de microbiología es un trabajo de grupo. La actitud ante las practicas seguras de cada uno de los integrantes del equipo, determinan su propia seguridad, así como la de sus compañeros y la de la colectividad del Laboratorio. Las características especiales del trabajo en el laboratorio, hacen importante que todos los participantes conozcan y respeten las normas mínimas de bioseguridad. La primera actividad que debemos desarrollarantes de realizar el trabajo de laboratorio es la de conocer y aplicar los principios de bioseguridad para ser conscientes de los riesgos a que se puede estar expuesto. Se recomienda revisar los videos microscopio parte 1 y microscopios parte 2 disponibles en http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm. Descripción de la practica 7

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Procedimiento: • Observe el material de vidrio y pida al Tutor y coordinador que le enseñe su adecuada manipulación. (cajas de petri, pipetas diferentes volúmenes, pipetas de Pasteur). • El material de vidrio en microbiología siempre debe ser utilizado estéril por lo que debe ser empacado con papel kraft antes de ser sometido a un proceso de esterilización, se debe tener especial cuidado en la manipulación del material ya que se puede contaminar con microorganismos provenientes de las manos, etc. • Identifique las asas de platino y reciba las indicaciones de uso por parte del Tutor o coordinador de laboratorio. • Prepare el material (vidriería) para hornear, recúbralo con papel Kraft, y séllelo con cinta indicadora de esterilidad. Proceda a esterilizarlo en el Horno a temperatura de 160 - 180 ºC, durante 2 horas. • Esterilice los medios de cultivo que el tutor le suministre en el autoclave a presión de 15 lb y 121 ºC durante 20 minutos. Tenga en cuenta las instrucciones de manejo de la autoclave. • Teniendo en cuenta lo observado en el vídeo sobre esterilización realice el lavado delmaterial de laboratorio suministrado, realice la prueba de azul de bromotimol y verifique si el material fue lavado correctamente. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) Cajas de petri, pipetas diferentes volúmenes, pipetas de Pasteur, horno, autoclave, azul de bromotimol Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudio atento de la teoría sobre: Bioseguridad, Equipos y materiales para manejo microbiológico con bioseguridad , Esterilización, agentes esterilizantes. y observar los vídeos correspondientes: Normas de Bioseguridad parte 1 - Normas de Bioseguridad parte 2 - Vídeo Esterilización y desinfección No olvide las recomendaciones de seguridad que dan en la ficha técnica de este documento. Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada para entregar en el preinforme 1. ¿Qué es bioseguridad? 2. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología? 3. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de esterilización con más uso en el laboratorio, en qué consiste cada uno de ellos y para qué materiales se utilizan:

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Agente de esterilización Esterilización con calor seco Esterilización con calor húmedo Radiaciones Filtración

Temperatura de uso (si se aplica)

Equipo Material que se puede utilizado esterilizar por este método.

4. Establezca las diferencias entre esterilización y desinfección 5. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente; cómo se clasifican según su proporción de agar y según su suministro de nutrientes? 6. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de un medio sólido? 7. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Gram? 8. ¿Qué diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas y Gram negativas? 9. Indique las principales características y estructuras en hongos y levaduras Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento o totalidad de puntos) preinforme, o se materiales presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 práctica (0 puntos) práctica o no objetivos dela desarrolla los práctica (45 laboratorios en puntos) su totalidad (15

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Informe

No presenta informe (0 puntos)

puntos) El informe se presenta incompleto o sin conclusiones (10 puntos)

Se entrega el preinforme completamente diligenciado (30 puntos)

30

100 Retroalimentación

10

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PRACTICA No. 2– Medios de Cultivo

Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas

Presencial Otra ¿Cuál

x Autodirigida 10% 2

Remota

Medios de cultivo Propósito(s): Los estudiantes deben conocer que para el desarrollo microbiano se requieren diferentes condiciones, que les brindan los medios de cultivo y que nos permiten diferencias y aislar los microorganismos Objetivo(s): 1. Aprender la preparación y manipulación de los medios de cultivo. Meta(s): • Preparar al menos dos medios de cultivo Competencia(s): • El estudiante desarrolla habilidades para preparar medios de cultivo para el trabajo en laboratorio

Fundamentación Teórica Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio deCultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial éste debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuada, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. 11

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Descripción de la practica Procedimiento: Preparación de medio de cultivo • Revise la etiqueta de los medios de cultivo, anote el nombre, la composición y forma de preparación. • Realice los cálculos para preparar los siguientes volúmenes de medio de cultivo tanto líquido como sólido: 325, 356 ml, 1567 ml, 131 ml y 24 ml • Prepare en un elenmeyer 325 mililitros de agar. De acuerdo a las indicaciones de preparación se utilizan 20 gramos de medio deshidratado por litro de agua. Recuerde para el cálculo se realiza una regla de tres: 20 gr....... 1000 ml X= (20 gr.x 325ml)/1000= 6.5 gr. X gr......... 325ml • Pese 6.5 gramos del agardeshidratado. Mida 325 mililitros de agua destilada con una probeta. De esos 325 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los 6.5 gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente adicione el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador. • A continuación lleve la preparación a disolver en la plancha de calentamiento, agite constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr la disolución total del Agar. Mida el pH con ayuda de cinta indicadora de pH. El rango de pH en este medio es de 7.0 a 7.5. Si se hace necesario la corrección del pH, añada al medio de cultivo preparado la cantidad adecuada de solución de ácido clorhídrico o de hidróxido sódico según el caso. • Tape la boca del erlenmeyer con un tapón de papel kraft y selle con cinta de enmascarar. Si las normas de preparación no indican otra cosa, la esterilización se lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centígrados, durante 15 minutos. • Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45°C. • Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de Petri, previamente esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan “abanicando” brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar hasta que solidifique. • A continuación realice la prueba de esterilidad que consiste en llevar los medios a incubar a 37 grados centígradosdurante 12 o 24 horas. Esta prueba se evalúa por la presencia o ausencia de crecimiento posterior a la incubación. Las placas con medio de cultivo y el caldo preparado son claros e incoloros hasta con una tonalidad amarillenta. • Prepare caldo nutritivo para tal fin solamente se emplean 8 gramos de Agar deshidratado por litro de agua. Realice la preparación de la misma manera. Dispense el caldo directamente en los tubos con tapa rosca. Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave. No olvide que cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben tener la tapa ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo, solo cambia el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse sobre una pipeta para lograr que se forme el pico de agar inclinado. • Reunir todas las cajas de agar nutritivo con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a 37 ºc por 24 a 48 horas. 12

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Reunir todas las cajas de agar sabouraud con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y marquelas con el número del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5 dias. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Frasco con medio de cultivo deshidratado, medio líquido y sólido, matraz o erlenmeyer de 500 mililitros , balanza, probeta, plancha decalentamiento, varilla de vidrio, agar nutritivo y cinta indicadora de pH. agar nutritivo (para crecimiento de bacterias), agar sabouraud (para crecimiento de mohos y levaduras) PARA TRAER: Espátulas de madera, papel de cocina o servilletas finas que no suelten pelos, cinta de papel, cinta trasparente, clips, papel kraft, Papel absorbente, Frasco de boca ancha Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudio atento de la teoría sobre: Medios de Cultivo. Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada para hacer el preinforme 1. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente; cómo se clasifican según su proporción de Agar y según su suministro de nutrientes? 2. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de un medio sólido? 3. ¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y por qué? Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif.Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de puntos) o preinforme, o materiales se presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 13

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práctica (0 puntos)

Informe

No presenta informe (0 puntos)

práctica o no desarrolla los laboratorios en su totalidad (15 puntos) El informe se presenta incompleto o sin conclusiones (10 puntos)

objetivos de la práctica (45 puntos)

Se entrega el preinforme completamente diligenciado (30 puntos)

30

100 Retroalimentación

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PRACTICA No. 3– Siembra de microorganismos

Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas

Presencial Otra ¿Cuál

x Autodirigida 20% 3

Remota

Prácticas de siembra Propósito(s): Que el estudiante conozca los métodos básicos de siembra de microorganismos Objetivo(s): 1. Determinar las condiciones necesarias para realizar la siembra de microorganismos 2. Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad. Meta(s): Desarrollar las prácticas de 9 sistemas desiembra Competencia(s): • El estudiante reconoce los diferentes sistemas de siembra de mircoorganismos

Fundamentación Teórica Observar vídeos: Métodos de siembra parte 1 , parte 2 y parte 3 Sembrar es colocar una muestra de inóculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han añadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. A esto lo llamamos medio de cultivo. A veces se añaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podrían contaminar el cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con líquidos nutritivos para los microorganismos. A continuación se procede a la "incubación" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en condiciones particulares de presión de oxígeno, temperatura, agitación, duración, etc. Muchas de las bacterias patógenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37ºC habituales de nuestro organismo. Si el cultivo bacteriano tiene éxito, crecerán "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias tienen características de color, forma, tamaño etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a identificarlas. También se puede someter a las bacterias de las colonias a pruebas bioquímicas o de otro tipo para lograr su identificación. Algunas bacterias son muy difíciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas, finalmente, no se han conseguido cultivar. 15

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Descripción de la practica Siembra de medio sólido a medio líquido • Marque correctamente los tubos con el número del grupo, sistema de siembra utilizado y la fecha. • Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de el. • Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y déjela enfriar. • Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tápelo y déjelo en una gradilla. Tome el tubo de caldo nutritivo estéril en el cual va a colocar la muestra, destapelo, flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida. • Realice movimientos de rotación con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape. • Esterilice el asa en el mechero después de usarla. • Incube los tubos a 37ºC por 24 horas. • Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente Siembra de medio líquido a sólido • Proceda en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa de argolla. Si la siembra es en tubo recuerde hacer punción y estría. Si es en caja puede utilizar diferentes sistemas como estría, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra de medio sólido a sólido • Proceda de la misma forma que en la siembra anteriorpero utilizando el asa recta. • Los medios sólidos contienen agar en proporción de 1.5 a 2.0% y se emplean para obtener colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios métodos: como estrías, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra en rejilla • Realice una estría que atraviese el centro del agar. Luego realice estrías en ángulo recto con respecto a la estría inicial. Voltee el agar en ángulo de 90 grados y realice estría hasta cubrir todo el agar. Siembra por agotamiento • Tome una placa de agar, marque la base de la caja de petri con los números 1, 2 y 3. Coloque la muestra a sembrar en el número 1, realice estrías hasta la mitad de la caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el número 2, tome las dos últimas estrías y siga estriando hasta el número 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar las estrías ya hechas. Siembra por estrías • Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto número uno, realice estrías hasta el número 2. Esterilice el asa, tome las dos últimas estrías y extiéndalas hasta el número 3, tome las dos últimas estrías y extiéndalas hasta el número 4 y así sucesivamente hasta llegar al número 6. Siembra masiva • Tome un hisopo estéril e introdúzcalo en el tubo que contiene la muestra a sembrar, luego frote toda la superficie del agar. La evaluación del crecimiento en las placas de agar se hace a través de la observación de colonias en la superficie. Siembra en agar inclinado • Esta se realiza por punción y por estría. Por punción: Introduzca el inoculo con el asa recta 16

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hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Por estría: Extienda el inoculo sobre el agar inclinado deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag. • No olvide flamear la boca del tubo antes y después de la siembra. • Evalué la presencia de crecimiento en el agar por la formación de una película o por el crecimiento de colonias en la superficie. Siembra en profundidad • Marque la caja de petri estéril con el número de grupo, la fecha y siembra en profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero. • Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plástica, transfiera 1 ml de éste cultivo a la base de la caja de petri estéril. Descarte la pipeta en el frasco de boca ancha con clorox. • Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice movimientos suaves sobre el mesón, en el sentido de las agujas del reloj, luego al contrario, en forma de L y L invertida, y por último en forma de 8. Esto garantiza una distribución homogénea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior recuento. • Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, márquelos con el número de grupo, la fecha. Luego incube 37º c por 48 horas. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) PARA TRAER: Asas bacteriológicas (Traer palitos de paleta, clips ycinta de enmascarar) Cepa “pura” de microorganismo (Favor traer material vegetal infectado con Aspergillus, Fusarium, Erwnia, Bacillus, etc), Fósforos DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Tubos con caldo nutritivo, Tubos con agar nutritivo inclinado, Cajas con agar nutritivo, Mechero de bunsen, Agar nutritivo fundido, Cajas petri estériles Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones: Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudio atento de la teoría sobre: Sistemas de siembra y los vídeos: Métodos de siembra parte 1, parte 2 y parte 3 (http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/3_4_2siembra.htm Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada: 1. ¿Cuál es el medio de cultivo que se emplea para el aislamiento de hongos y levaduras? Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica 17

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Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Aprestamiento No se lleva aprestamiento o no se lleva preinforme (0 puntos)

Calif. Media Solamente se lleva aprestamiento o preinforme, o se presentan incompletos (10 puntos)

Práctica

No se presenta a la práctica (0 puntos)

Informe

No presenta informe (0 puntos)

Llega tarde a la práctica o no desarrolla los laboratorios en su totalidad (15 puntos) El informe se presenta incompleto o sin conclusiones (10 puntos)

Calif. alta Se llevan al laboratorio la totalidad de materiales solicitados y el preinforme completamente diligenciado (25 puntos) Se cumplen los objetivos de la práctica (45 puntos)

Puntaje 25

45

Se entrega el preinforme completamente diligenciado (30 puntos)

30

100 Retroalimentación

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PRACTICA No. 4– Observación de microorganismos y técnicas de tinción Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas Presencial Otra ¿Cuál x Autodirigida Remota

20% 3 Siembra de Microorganismos Propósito(s): El estudiante comprende el funcionamiento de los colorantes para la observación y diferenciación de microorganismos Objetivo(s): 1. Conocer y estudiar la morfología de bacterias, mohos y levaduras. 2. Conocer y aplicar diferentes métodos de tinción para la identificación de los microorganismos 3. Determinar las características morfológicas microscópicas como formay agrupación. 4. Aprender a diferenciar los microorganismos Gram positivos de los Gram negativos. Meta(s): Desarrollar una práctica de tinción simple, otra para hongos y levaduras Desarrollar una práctica de tinción de Gram Competencia(s): Al finalizar la práctica el estudiante debe estar en capacidad de realizar técnicas de tinción en el laboratorio

Fundamentación Teórica El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de la fijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tinción. La fijación 19

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produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión. La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de las gránulos o depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán. Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacarel colorante. Descripción de la practica Procedimiento: A. Tinción Simple • Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes • Encienda el mechero y esterilice el asa, (curva para el cultivo líquido y recta para el cultivo sólido). Déjela enfriar cerca del mechero. • Recoja con el asa estéril cultivo de la bacteria, al lado del mechero. • En una lámina portaobjetos limpia, desengrasada y marcada, coloque una pequeña gota de solución salina estéril y realice una suspensión homogénea del cultivo, (si el cultivo es sólido). Si el cultivo bacteriano es líquido coloque una pequeña gota de éste en la lámina portaobjetos y extiéndala. • Dejé que es frotis se seque a temperatura ambiente. Luego pase la lámina portaobjetos por el mechero 3 veces (con el frotis en la parte de arriba) con el fin de fijar el extendido. • Coloque la lámina en el soporte de coloración y cubra el frotis con azul de metileno durante 2 minutos. • Lave suavemente el frotis con agua con un frasco de boca ancha y deje escurrir sobre papel absorbente hasta que seque. • Observe al microscopio con el Objetivo 100 x (de inmersión) colocando una gota de aceite de inmersión sobre el frotis. Recuerde colocar el condensador arriba y el diafragma abierto. • Dibuje sus observaciones. Para hongos y levaduras 20

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• Coloque cerca al mechero el alimento con hongos y con ayuda de cinta pegante, recoja muestra de la superficie. • Marque la lámina con cinta deenmascarar: número del grupo y coloración. • Coloque en el centro de la lámina portaobjetos una pequeña gota de azul de Lactofenol, y luego pegue la cinta a la lámina. Presione ligeramente para eliminar burbujas de aire. • Observe en el microscopio en los objetivos de 10x y 40x. Realice una posible identificación del hongo con los diagramas que encuentra en el laboratorio. • Dibuje sus observaciones B. Coloración de Gram • Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes • Realice 2 frotis como se indicó para la coloración simple. • Deje secar al aire libre y luego fije el frotis. • Marque la lámina con cinta de enmascarar: número del grupo y coloración. • Coloque la lámina en el soporte de coloración. • Coloque sobre el frotis una pequeña cantidad de Cristal Violeta durante 1 minuto • Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua. • Aplique la solución de Lugol por 1 minuto. • Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua. • Decolore aplicando Alcohol - acetona durante 30 segundos • Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua. • Aplique el colorante de contraste Safranina durante 1 minuto. • Por último lave con agua y deje escurrir sobre papel absorbente a temperatura ambiente. • Observe al microscopio con el Objetivo 100 x (de inmersión) colocando una gota de aceite de inmersión sobre el frotis. • Dibuje sus observaciones. Una vez terminada ésta actividad, coloque las láminas portaobjetos usadas dentro del frasco de boca ancha con agua y Clorox. Deseche en la basura los alimentos analizados. Desconecte el microscopio, limpie sus lentescon Xilol y pañuelos desechables triple hoja (únicamente), las demás superficies del microscopio puede limpiarlas con los paños absorbentes y alcohol antiséptico. Por último realice la entrega del microscopio al coordinador del laboratorio. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Cepas de microorganismos, Azul de Lactófenol. Azul de metileno, Colorantes de Gram: Cristal violeta, Lugol, Alcohol acetona, Fucsina, Microscopio, Soporte para tinción, Láminas portaobjetos, Láminas cubreobjetos, Mechero de Bunsen, PARA TRAER: Cinta pegante, un alimento contaminado con hongos, Asas bacteriológicas, Papel absorbente, Frasco de boca ancha, Solución salina fisiológica estéril Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones: Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudio atento de la teoría 21

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sobre: Observación de microorganismos y técnicas de tinción Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada: 1. ¿Según su morfología, como se clasifican las bacterias? 2. ¿Cómo se diferencia una tinción simple de una tinción diferencial? Escribaalgunos ejemplos de cada una de las tinciones 3. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Gram? 4. ¿Qué diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas de Gram negativas? 5. ¿Cómo se realiza el frotis bacteriológico y en qué consiste el proceso de fijación? Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de puntos) o preinforme, o materiales se presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 práctica (0 puntos) práctica o no objetivos de la desarrolla los práctica (45 laboratorios en puntos) su totalidad (15 puntos) Informe No presenta informe El informe se Se entrega el 30 (0 puntos) presenta preinforme incompleto o completamente sin conclusiones diligenciado (30 (10 puntos) puntos) 22

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100 Retroalimentación

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PRACTICA No. 5– Microorganismos del ambiente Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas Presencial Otra ¿Cuál x Autodirigida Remota

10% 2 Determinación de flora ambiental, humana y de superficie Propósito(s): El estudiante entiende que los microorganismos están presentes en todos los ambientes y hacen parte de la cotidianidad. Objetivo(s): 1. Realizar la determinación de flora humana, ambiental y de superficies 2. Revisar el grado de contaminación por bacterias, mohos y levaduras de las muestras de ambientes y superficies. 3. Verificar la efectividad en el proceso de limpieza y desinfección Meta(s): Desarrollar dos prácticas para determinar los microorganismos presentes en su entorno Competencia(s): • El estudiante reconoce la presencia de microorganismos y su importancia en la vida diaria

Fundamentación Teórica Los microorganismos se encuentran en todas partes. Son llevados de un lugar a otro por diferentes métodos entre los que están las corrientes de agua, aire, insectos, etc. El aire no es un medio de reproducción, en él y junto a las gotitas, se transportan gran cantidad de microorganismos. Se encuentran en los sedimentos marinos, en la piel del hombre, en las escamas de los peces, en la superficie de las hojas de los vegetales, en los alimentos, en el conducto digestivo, naríz, boca, etc. Son de especial importancia en la fertilidad de los suelos, la transformación de desechos o ciertos procesos agroindustriales en los que se involucra la fermentación(cerveza, lácteos fermentados, productos de soya fermentados, etc.) La piel y las mucosas sirven de albergue a un gran número de microorganismos que se pueden determinar como flora residente y flora transitoria, si éstos son permanentes o se pueden controlar cuando cambian las condiciones para su desarrollo. Descripción de la practica Procedimiento: 24

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Determinación de Flora Ambiental • Marque una caja de Agar nutritivo y otra de Agar Sabouraud con cinta en la base, con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y flora ambiental. • Escoja un sitio seguro en el laboratorio o en la Universidad. Recuerde: No salir con la bata del laboratorio • Abra las cajas y exponga al aire por 15 a 30 minutos. • Pasado el tiempo, Reunir todas las cajas de Agar nutritivo con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a 37 ºc por 24 a 48 horas. • Reunir todas las cajas de Agar Sabouraud con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5 días. Determinación Flora de Superficie El análisis de la superficie se realiza antes de hacer la limpieza y después Antes de Limpiar • Marque una caja de agar nutritivo y otra de agar sabouraud con cinta en la base, con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y superficie antes de limpiar. • Escoja una superficie en ellaboratorio (mesones, pisos, pared) • Delimite con la plantilla de cartulina (4x4 cm. aproximadamente) el sitio a muestrear • Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla. • Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada • Encienda el mechero de Bunsen • Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja. • Abra la caja de agar Sabouraud marcada cerca del mechero y realice el mismo procedimiento que realizó con el Agar nutritivo. Cierre la caja. • Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y clorox. • Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo. Procedimiento de Limpieza • Limpie la zona delimitada con agua y jabón. Enjuague, seque y luego desinfecte con alcohol, agua mezclada con clorox o algún desinfectante de su interés. Deje secar. Después de Limpiar • Marque una caja de agar nutritivo y otra de Agar Sabouraud con cinta en la base, con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y superficie después de limpiar. • Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla. • Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada y limpia. • Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja. 25

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• Abra la caja de agar sabouraud marcada cerca del mechero y realice el mismo procedimiento que con el agar nutritivo. Cierre la caja. • Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y clorox. • Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo. • Reunir todas las cajas de Agar Sabouraud con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5 días. Determinación de Flora Humana Antes de Limpiar • Marque una caja de Agar nutritivo con cinta en la base, con los siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y flora humana antes de limpiar. • Escoja un área en el cuerpo de un compañero de grupo. • Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla. • Pase suavemente el hisopo humedecido sobre el área escogida. • Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja. • Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y clorox. • Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo. Procedimiento de Limpieza • Limpie el área elegida con agua y jabón. Enjuague y seque. No aplique alcohol ni clorox. Después de Limpiar • Marque una caja de agar nutritivo con cinta en la base, con los siguientes datos: No. De grupo, fecha, medio de cultivo y flora humana después delimpiar. • Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estéril, introduzca el hisopo para humedecer el algodón. Coloque el tubo en la gradilla. • Pase suavemente el hisopo humedecido sobre el área escogida, limpia. • Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el hisopo sobre el agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja. • Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y clorox. • Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesón de trabajo. Reunir todas las cajas de Agar Sabouraud con la tapa hacia arriba, envuélvalas con cinta de enmascarar y márquelas con el número del grupo. Incubar a temperaturaambientepor 3 a 5 días. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) DISPONIBLES EN EL LABORATORIO: 5 cajas Petri con Agar nutritivo (para crecimiento de bacterias), 3 cajas Petri con Agar Sabouraud (para crecimiento de mohos y levaduras), gradilla, mechero de Bunsen, fósforos, plantilla en cartulina de 4 x4 cm, microscopio. PARA TRAER: frasco de boca ancha con agua y decol, tubos con agua destilada estéril, hisopos estériles con palo de madera, cinta de enmascarar 26

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Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones: Antes de iniciar la práctica, debes ver los videos: Determinación de Flora ambiental parte 1 Determinación de Flora ambiental parte 2, Determinación de Flora ambiental parte3 Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología para la presentación del preinforme Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada 1. ¿Cuáles son las diferencias entre flora residente y flora transitoria? Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de puntos) o preinforme, o materiales se presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 práctica (0 puntos) práctica o no objetivos de la desarrolla los práctica (45 laboratorios en puntos) su totalidad (15 puntos) Informe No presenta informe El informe se Se entrega el 30 (0 puntos) presenta preinforme incompleto o completamente sin conclusiones diligenciado (30 (10 puntos) puntos) 100 27

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Retroalimentación

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PRACTICA No. 6– Observación y recuento de colonias Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas Presencial Otra ¿Cuál x Autodirigida Remota

10% 2 Observación y recuento de colonias de las cajas de Agar Nutritivo de la Práctica de Flora ambiental y Flora Humana Propósito(s): Que el estudiante sea capaz de hacer un recuento directo al microscopio Objetivo(s): 1. Diferenciar las formas de crecimiento bacteriano en los diferentes medios de cultivo utilizados. 2. Realizar el recuento de las diferentes colonias. Meta(s): Realizar la observación y descripción de dos colonias de microorganismos Competencia(s): • El estudiante adquiere las habilidades para hacer el recuento de colonias microbianas

Fundamentación Teórica Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de agua, suelo, aire, alimento, cultivos, entre otros, existen diferentes métodos o técnicas: Algunas técnicas son directas y permiten un recuento de todas las células, tanto las vivas como las muertas. Las medidas directas incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrónico, el recuento en placa, o el cálculo del número más probable (NMP). Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la masa de las células como son la turbidez, el peso seco, o una actividad metabólica. Ver también:Factores que afectan el crecimiento bacteriano parte 1 y parte 2 Descripción de la practica Procedimiento: • Solicite al coordinador del laboratorio las cajas sembradas en la práctica: “Métodos de siembra de microorganismos” y "Microorganismos del ambiente" • Al lado del mechero abra las cajas correspondientes a flora humana y ambiental y observe la presencia de colonias. Preferiblemente utilice el estereoscopio colocando debajo de la caja un fondo negro. El crecimiento se observa como puntos de diferentes colores y formas sobre la superficie del agar. Realice el recuento de colonias en cada una de las cajas. • Cuente las colonias de bacterias presentes en la superficie del Agar. Exprese el recuento en unidades UFC. 29

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•

• Revise el grado de contaminación bacteriana de las cajas sembradas. Un número de colonias superior a 15 indica alto grado de contaminación, por lo tanto deben revisarse las medidas de limpieza • Verifique la efectividad de la limpieza y desinfección que realizó. • A cada tipo de colonia que se observa, se le debe hacer el estudio macroscópico teniendo en cuenta las siguientes características: • Tamaño: puntiforme, pequeña, mediana, grande, extendida • Forma: Redonda, ovalada, irregular, filamentosa, rizoide • Elevación: Plana, elevada, convexa, monticular, umbeliforme, umbilicada • Borde: Entero, ondulado, lobulado, aserrado, filamentoso, rizado. • Superficie: Brillante o mate. • Consistencia: dura,blanda • Aspecto: húmedo, seco, cremoso, mucoso, granuloso, algodonoso. • Color: blanco, crema, gris, transparente. • Crecimiento: Abundante, moderado, escaso • Características especiales: pigmentos, hemólisis. • Anote y dibuje sus observaciones. • Observe el crecimiento de mohos y levaduras. Los primeros se observan algodonosos, de diferentes colores; y las levaduras como colonias opacas de color crema, amarillo o rosado. • Realice el recuento y recuerde: cuando se obtiene un recuento mayor a 15 colonias indica un ambiente muy contaminado. ¿Qué nivel de contaminación tiene el ambiente que usted eligió? (Información que debe analizar en el informe): • Analice los resultados de los recuentos antes y después de limpiar, escriba algunas sugerencias en cuanto a las metodologías de limpieza utilizadas. • Observe el crecimiento bacteriano en los caldos nutritivos y en las cajas de agar. Anote las diferencias. • Realice una evaluación objetiva de sus aislamientos y siembras, escriba algunas recomendaciones para sus próximas siembras. • Una vez terminada esta sección de la práctica, envuelva las cajas Petri con cinta de enmascarar. Marque en la cinta el número del grupo. Entregue el material al grupo encargado de la esterilización. • Después del proceso de esterilización, espere que el material este frío para proceder con el lavado de la siguiente manera: 1. Retire los restos de agar y cinta de enmascarar y deposítelos en una bolsa para basura. No deje residuos en los vertederos!!! 2. Enjabone las cajas y demás material utilizado. 3. Enjuague bien, deje escurrir y seque el material. 4.Entregue todo el material al coordinador del laboratorio. Recuerde dejar el laboratorio en perfecto estado de limpieza. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: microscopio, estereoscopio, láminas portaobjetos y cubreobjetos, cuentacolonias, cajas de Petri y tubos con cultivos realizados en el laboratorio No 2: 30

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Métodos de siembra de microorganismos y en el laboratorio 4: Flora ambiental humana y de superficie, Azul de lactofenol, aguja de disección. PARA TRAER: Mechero, papel carbón Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones: Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudio atento de la teoría sobre: Recuento microbiano Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada 1. Identifique y describa las características de cada una de las fases de la curva de crecimiento de los microorganismos (latencia, logarítmica, estacionaria y muerte) Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y eldesarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de puntos) o preinforme, o materiales se presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 práctica (0 puntos) práctica o no objetivos de la desarrolla los práctica (45 laboratorios en puntos) su totalidad (15 puntos) Informe No presenta informe El informe se Se entrega el 30 (0 puntos) presenta preinforme incompleto o completamente 31

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sin conclusiones (10 puntos) Retroalimentación

diligenciado (30 puntos) 100

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PRACTICA No. 7– Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos. Tipo de practica Porcentaje de evaluación Horas de la practica Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas Presencial Otra ¿Cuál x Autodirigida Remota

10% 2 Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos Propósito(s): El estudiante distingue entre esterilización y desinfección Objetivo(s): 1.Evaluar la eficacia de algunos desinfectantes sobre algunos microorganismos Meta(s): Probar la eficacia de al menos 4 desinfectantes Competencia(s): • El estudiante conoce la forma de utilizar los desinfectantes para el control microbiano.

Fundamentación Teórica Se define esterilidad a la condición de ausencia de cualquier microorganismo. Significa destrucción de toda forma de vida microbiana incluyendo esporas. Los métodos de esterilización más usados en el laboratorio son calor seco, calor húmedo, flameado, utilización de soluciones químicas. La desinfección se refiere a la reducción de los organismos patógenos (organismos que ocasionan enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composición química se clasifican en: Fenoles, Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario, Formaldehídos, Peróxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de nivel intermedio o de alto nivel. Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden destruir la mayor parte de las formas vegetativas bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus con envoltura lípidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacteriumspp, ni las esporas bacterianas. Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayoría de los virus (virus con y sin envoltura) y hongos filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas bacterianas. En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehídos, peróxidos, hipocloritos) consiguen destruir todos losmicroorganismos, excepto algunas esporas bacterianas. Descripción de la practica • Marque las 2 cajas de agar nutritivo con: el número del grupo, fecha y microorganismo en la tapa de la caja. • Codifique los desinfectantes a emplear con un código. Ejemplo Hipoclorito 01, CTmanos 02, CT 33

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industrial 03, Creolina 04, Glutaraldehido 06. • Coloque en la base de la caja en forma equitativa, los códigos de los desinfectantes con un marcador de vidrio. • Encienda el mechero. • Humedezca un hisopo estéril en el tubo del microorganismo a sembrar. Escurra el exceso con las paredes internas del tubo. • Siembre masivamente cada una de las bacterias en la caja de agar nutritivo que le corresponde. Tenga en cuenta que las levaduras y el hongo se siembran en agar sabouraud. • Descarte los hisopos en el frasco de boca ancha con solución de hipoclorito. • Con las pinzas estériles tome un disco de papel de filtro y sumérjalo en la solución de desinfectante y colóquelo sobre el número que le corresponde según la codificación de la base de la caja. Repita lo mismo con cada uno de los desinfectantes utilizados en cada una de las cajas. • Coloque las pinzas dentro del frasco de boca ancha. • Envuelva las cajas de agar nutritivo con cinta y márquelas con el número del grupo. Lleve las cajas a incubar a temperatura de 37º C. por 24 horas. Cumplido el tiempo de incubación tome las cajas y con ayuda del cuenta colonias observe la formación dehalos de inhibición del crecimiento, que aparecen como zonas transparentes alrededor del crecimiento bacteriano. Mida el tamaño de los halos de inhibición con una regla. Según sus observaciones indique cuál sustancia es mejor en el control de cada microorganismo de prueba Una vez terminada la práctica, descarte los escobillones desinfectados en una bolsa para este fin, envuelva las cajas en cinta de enmascarar, márquelas con el número del grupo y entréguelas al grupo encargado de la esterilización. Una vez esterilizado el material, proceda al lavado como se ha indicado en prácticas anteriores Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Hisopos estériles, Discos de papel filtro estériles, Pinzas estériles, Hipoclorito de sodio al 5%, 4 cajas de petri con agar nutritivo, 2 cajas con Agar Sabouraud, Cepas bacterianas en caldo nutritivo, cuenta colonias. PARA TRAER: Isodine solución, Jabón desinfectante, Timsen, Creolina, Alcohol antiséptico, Frasco de boca ancha, regla. Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica Recomendaciones: Ver vídeos: Esterilización parte 1 y parte 2 , Efecto de los desinfectantes sobre los microorganismos Seguridad Industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad Metodología Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente cuestionario y luego del desarrollo de la práctica, se debe entregar el informe de práctica: Cuestionario de entrada 34

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1. ¿Cuales agentes químicos son más efectivos en el control de microorganismos? 2. ¿Con que criterios se selecciona un agente químico para desinfectar: superficies, ambientes, objetos contaminados, la piel? 3. ¿Qué pruebas se utilizan para probar la efectividad de un desinfectante? Sistema de Evaluación El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las prácticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%. Informe o productos a entregar Informe de práctica Rúbrica de evaluación Ítem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25 aprestamiento o no se lleva laboratorio la lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de puntos) o preinforme, o materiales se presentan solicitados y el incompletos (10 preinforme puntos) completamente diligenciado (25 puntos) Práctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45 práctica (0 puntos) práctica o no objetivos de la desarrolla los práctica (45 laboratorios en puntos) su totalidad (15 puntos) Informe No presenta informe El informe se Se entrega el 30 (0 puntos) presenta preinforme incompleto o completamente sin conclusiones diligenciado (30 (10 puntos) puntos) 100 Retroalimentación

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6. FUENTES DOCUMENTALES PIÑA LÓPEZ, Carmen Eugenia. Módulo de Microbiología. Unad MARTÍNEZ, María Mercedes. UNAD. Microbiología. Facultad de Ciencias Básicas e Ingeniería. MERCK. MANUAL DE MEDIOS DE CULTIVO. http://www.scribd.com/doc/5203044/Medios-de-Cultivo-y-Pruebas-Bioquimicas RECURSOS: Videos de las experiencias, disponibles en en el CD de microbiología o en http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/6_1multimedia.htm. Para visualizar los vídeos y animaciones, es necesario tener el software Authorware_web_player y el software Flash player en su PC. Los cuales puede descargar de la siguiente carpeta: programas flash y authoware , que además de los programas contiene las instrucciones de instalación. Vídeos 1. Normas de Bioseguridad parte 1 2. Normas de Bioseguridad parte 2 3. Esterilización, desinfección y manejo de equipos parte 1 4. Esterilización, desinfección y manejo de equipos parte 2 5. Preparación de medios cultivo parte 1 6. Preparación de medios cultivo parte 2 7. Métodos de siembra parte 1 8. Métodos de siembra parte 2 9. Métodos de siembra parte 3 10. Determinación de Flora ambiental parte 1 11. Determinación de Flora ambiental parte 2 12. Determinación de Flora ambiental parte 3 13. Efectos de los desinfectantes sobre los microorganismos 14. Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos Parte 1 15. Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos Parte 2 16. Metabolismo Microbiano parte 1 17. Metabolismo Microbiano parte 2 18. MetabolismoMicrobiano parte 3

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