PREPARACIÓN DE MEDIOS, ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AIRE Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE CULTIVOS

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS[pic 1]

Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales

Ingeniería agroindustrial

Informe de microbiología

IV semestre

PREPARACIÓN DE MEDIOS, ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AIRE Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE CULTIVOS.  

Fuentes Valdez Valeria 1, Osorio Pedraza Angie 2, Pachón Gómez David3, Zuleta León Andrea4

1170039451, 1170039312, 1170039333, 1170039434

Estudiantes de ingeniería agroindustrial

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RESUMEN

El objetivo que precedió las practicas fue principalmente el conocer y aplicar técnicas para realizar  análisis microbiológicos tanto de áreas como de objetos y colonias según el medio de desarrollo, lo anterior se llevó a cabo por medio de la preparación de medios de cultivo  (agar nutritivo y agar PDA) en base a las etiquetas y cálculos, luego se procedió a seleccionar los sitios para las muestras del estudio microbiológico del aire dejando las cajas de petri a la intemperie, se tapó la muestra y se llevo a incubar a 35°C, la caja de agar nutriente durante 24 horas, la caja de PDA se incubó a temperatura ambiente durante 3 días. Además se tomaron muestras de un cultivo de hongos por el método de punción y de bacterias por agotamiento, finalmente el grupo de trabajo logra deducir la importancia de las cantidades y espacios de exposición a la temperatura y a la esterilización de los medios de cultivo, además de comprender la variedad de microorganismos según el espacio y su proveniencia.

Palabras clave: análisis microbiológico, colonias, medios de cultivo, método de punción, método por agotamiento.

ABSTRACT

The objective that preceded the practices was mainly to know and apply techniques to perform microbiological analysis of both areas and objects and colonies according to the development medium, the previous was carried out by means of the preparation of culture media (nutritive agar and PDA agar) based on the labels and calculations, then we proceeded to select the sites for the samples of the microbiological study of the air leaving the petri dishes out in the open, the sample was covered and incubated at 35 ° C, the box of nutrient agar for 24 hours, the PDA box was incubated at room temperature for 3 days. In addition, samples of a mushroom culture were taken by the puncture method and bacteria by exhaustion.

Keywords:  microbiological analysis, colonies, culture media, puncture method, exhaustion method.

1. INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de creciemiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el crecimeinto de mircoorganismos. Se clasifican según  el parametro de estudio que quiera analizar, estos pueden ser simples, enriquecidos, diferenciales o selectivos. Los constituyentes habituales de medios de cultivo son el agar(se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo); extractos de ciertos organos y tejidos animales o vegetales, los mas utilizados son de carne, levadura y malta; las peptonas que son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales; fluidos corporales como el plasma sanguineo; entre otros constituyentes. (1)

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de microorganismos, especialmente bacterias y hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del origen, e la dirección e intensidad de las corrientes de aire y de la supervivencia del microorganismo. Algunos microorganismo se encuentran en forma de células vegetativas, pero lo mas frecuente son las formas esporuladas, ya que las esporas son metabólicamente menos activas y sobreviven mejor en la atmosfera por que soportan la desecación. Las producenhongos, algas, líquenes, algunos protozoos y algunas bacterias. En el aire se aíslan frecuentemente bacterias esporuladas de los géneros Bacillus, Clostridium y Actinomicetos.Los microorganismos dispersados por el aire tienen una gran importancia biológica y económica. Producen enfermedades en plantas, animales y humanos, causan alteración de alimentos y materiales orgánicos y contribuyen al deterioro y corrosión de monumentos y metales. (2)

Muchos métodos se han sugerido para efectuar el análisis bacteriológico de aire para determinar el número de microorganismos por unidad de volumen. Tales métodos incluyen los de sedimentación, choque en agar, choque en líquidos y filtraciones.

Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir  una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. (3)

Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias. (4)

el Agar PDA( Agar de destroxa y papa) que tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa que son la base para el crecimiento de hongos y levaduras; adicionalmente también se trabajo el Agar Nutritivo que contiene extractos de carne, peptonas y Agar que proporcionan fuente de carbohidratos, nitrógeno y vitaminas. (5)

Una vez determinado el número de colonias, y sabiendo el flujo de aire y el tiempo de muestreo que se ha aplicado, se puede calcular el número de unidades formadoras de colonias por metro cúbico de aire, aplicando la fórmula siguiente:

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NC numero de colonias por placa.

UN  Número de unidades de tiempo empleadas en el muestreo.

1. MATERIALES Y MÉTODOS

Tabla 1. Materiales usados durante las prácticas relacionadas.

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Para la primera práctica se prepararon varios medios de cultivo entre agar nutritivo y agar PDA,  en primera instancia se realizaron los cálculos referentes a la cantidad de componentes que debía llevar cada caja de petri siguiendo las indicaciones de las etiquetas, se trabajo por grupo con 320ml de agua destilada  y 6,4g de agar nutritivo, para el agente solidifícate PDA según la etiqueta del mismo por litro la cantidad de gramos debía ser mayor, por ello cada grupo dispuso de 320ml con 12,48g de agar. Se procedió a calentar la solución hasta el punto de ebullición para la respectiva homogenización, y con el uso de la autoclave a 121°C se esterilizaron los medios.

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