PRÁCTICA No. 4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Enviado por Yelitooh • 22 de Octubre de 2016 • Prácticas o problemas • 3.038 Palabras (13 Páginas) • 597 Visitas
UNIVERSIDAD VERACRUZANA[pic 1][pic 2]
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 4
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
INTRODUCCIÓN
Los microorganismos heterotróficos a cuyo grupo pertenecen los gérmenes patógenos, necesitan una amplia variedad de exigencias para su cultivo; la exigencia más importante es la nutricional que se puede satisfacer en un medio de cultivo. Los componentes básicos para un medio de cultivo de microorganismos son los siguientes:
1. Extracto de carne: el cual aporta al medio de cultivo carbohidratos, componentes orgánicos nitrados, vitaminas y sales.
2. Peptonas: obtenidas a través de una hidrólisis parcial de proteínas, aportan nitrógeno orgánico.
3. Agar: es un carbohidrato obtenido de algas marinas, da consistencia sólida al medio por su acción como coagulante. No aporta ningún valor nutritivo.
Existen medios de cultivo sólidos que contienen suficiente agar, medios semisólidos que contienen una cantidad mínima de agar y medios líquidos (caldos) que no contienen agar ni gelatina. De acuerdo a la composición química de los medios de cultivo se pueden clasificar como:
1. Medios simples: están compuestos por los nutrientes básicos, ejemplo: Agar y caldos nutritivos.
2. Medios enriquecidos: contienen sustancias que proveen al medio de nutrientes necesarios para el desarrollo de microorganismos exigentes, por ejemplo: Agar chocolate y agar sangre.
3. Medios selectivos: contienen sustancias que inhiben el crecimiento de algunos microorganismos pero que permiten el desarrollo de otros, ejemplo: Medio de
Salmonella-Shigella.
4. Medios diferenciables: contienen sustancias químicas que permiten diferenciar las transformaciones metabólicas ocurridas en el medio por las bacterias.
También existen medios semisólidos, que se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias, pues estas son capaces de atravesar el cultivo. Entre estos destacan el agar SIM y agar MIO.
De acuerdo en la manera en que se utilizarán, los medios de cultivo sólidos se pueden emplear en diversas formas:
✠ En placa: se utilizan cajas Petri, adicionando el medio de cultivo todavía liquido ya esterilizado, a una temperatura aproximada entre 45 y 50 °C para evitar la formación de agua en la tapadera de la caja. El volumen que se adiciona es de aproximadamente 15 o 20 ml.
✠ En tubo de agar inclinado: los tubos con agar esterilizado todavía líquido, son colocados en una posición inclinada de tal forma que se forme una capa aproximada de 3 cm y una superficie inclinada de iguales dimensiones dejando que se solidifique. Los tubos de agar inclinado se han utilizado para conservación de cepas en algunas pruebas bioquímicas.
Medios de cultivo líquido se usan por lo general en un tubo en cantidades especificas para cada prueba.
Los recipientes destinados a la preparación se limpiaran perfectamente con agua limpia destilada esto es con el fin de eliminar cualquier residuo de otra sustancia que pueda alterar la composición del medio. Es importante tener en cuenta que el recipiente sea grande, para que el medio de cultivo que se prepare pueda ser agitado con facilidad y no se derrame.
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Medio de cultivo | Fundamento | Microorganismos |
Agar MacConkey | Sirve como indicador de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-). | Bacterias gram negativas y cepas que fermenten la lactosa. Con cristal violeta es un medio selectivo y diferencial para detección de Enterobacterias en muestras de origen diverso. |
Agar Salmonella y Shigella (Agar S.S.) | Es un medio selectivo de aislamiento y diferenciación recomendado para la detección de las especies Salmonella y Shigella. La inhibición de microorganismos Gram-positivos se obtiene por una mezcla de sales biliares y colorantes. | Las colonias de Salmonella son incoloras o de color amarillo pálido, con o sin un centro negro. Las colonias de Shigella son incoloras o de color rosa pálido o naranja sin centro negro. |
Agar EMB | La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. | Es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. |
Agar de Vogel Johnson (AVJ) | En el medio de cultivo, la tripteína y el extracto de levadura, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El manitol es el hidrato de carbono fermentable. El telurito, el cloruro de litio y la alta concentración de glicina, son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de la flora acompañante y el rojo fenol es el indicador de pH. | Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos coagulasa positivo fermentadores de manitol, a partir de alimentos y otros materiales de importancia sanitaria y clínica. Los estafilococos coagulasa positivo, fermentan el manitol, produciendo la acidificación del medio y el viraje del indicador de pH al color amarillo, y también reducen el telurito a teluro. Debido a esto, se observan como colonias de color negro, rodeadas de una zona amarilla. |
Agar de Sal y Manitol | Contiene una alta concentración (~7.5%-10%) de sal (NaCl), haciéndolo selectivo para Staphylococci (y 'Micrococcaceae) debido su alta concentración de NaCl es inhibitorio para la mayoría de las bacterias Gram negativas. Además es contiene manitol otro inhibidor de bacterias Gram negativas y un indicador de pH indicador de fermentación; rojo de fenol. | Permite el crecimiento de bacterias Gram positivas mientras inhibe el crecimiento de Gram negativas. Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. |
Base agar sangre | Éste medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate. La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. | Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. |
Caldo nutritivo | Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. | Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Puede ser utilizado además, como preenriquecimiento en la búsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos. |
Caldo de tioglicolato | Este medio favorece un buen crecimiento de una amplia variedad de organismos, incluidos los anaerobios estrictos, sin incubación en una atmósfera anaerobia. El tioglicolato sódico no sólo reduce el potencial de oxidación-reducción, sino también posee la capacidad de neutralizar la actividad antibacteriana de los compuestos con mercurio. En microbiología clínica se puede utilizar como medio de enriquecimiento para muestras clínicas. | Es un medio líquido de enriquecimiento de uso general utilizado en procedimientos cualitativos para la prueba de esterilidad y para el aislamiento y cultivo de aerobios como anaerobios y microaerófilos que no son exigentes en exceso. |
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