Practica No. 4 identificación y cuantificación de proteínas.

Practica No. 4 identificación y cuantificación de proteínas.

URIEL CASTRUITA SANTOS   - 144211

Universidad Autónoma de Cd. Juárez – Instituto de Ciencias Biomédicas.

Laboratorio de Bioquímica.

RESUMEN

Las proteínas son macromoléculas compuestas por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. La mayoría también contiene azufre y fósforo. Están formadas por la unión de varios aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos. Las proteínas constituyen alrededor del 50% del peso seco de los tejidos y no existe proceso biológico alguno que no dependa de la participación de este tipo de sustancias. Para identificarlas existen varias técnicas, en esta práctica, se utilizaran 3, que son: Reacción de Ninhidrina, Reacción Xantoproteica y Reacción de Biuret.

Introducción

Proteína: la palabra proteína fue propuesta en 1838 por el químico sueco Jacob Berzeluis (1779- 1848) para nombrar el elemento orgánico principal en materias organizas. Este término está compuesto del griego protos que significa primero y el sufijo –ina, Las proteínas están formadas por: carbono, oxígeno, hidrógeno y nitrógeno fundamentalmente, aunque también podemos encontrar, en alguna de ellas, azufre, fósforo. La parte más pequeña en que pueden dividirse son los aminoácidos, podemos clasificar las proteínas en: Proteínas esenciales y no esenciales. Las proteínas tienen las siguientes funciones: estructural, enzimática, hormonal, defensiva, transportadora y de reserva.

La identificación de proteínas es muy importante para diversos campos, para su investigación se utilizan diferentes técnicas en esta practica usaremos tres, la reacción de Ninhidrina, reacción Xantoproteica y reacción de Biuret.

Reacción de Ninhidrina: La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos, reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.

Reaccion Xantoproteica: es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado amarillo concentrado, la prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en la tirosina.

Reacción de Biuret: la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace pepitico que se destruye al liberarse los aminoácidos, cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret.

Objetivo

Identificar proteínas por la presencia de enlaces peptidicos y grupos aromático, y cuantificarlas mediante la técnica de Biuret.

Materiales

-15 tubos de ensayo

-1 gradilla

-5 pipetas de 1.0 ml.

- 4 pipetas Pasteur

- 2 pipetas de 5.0 ml.

- 1 pipeta de 10.0 ml.

- 1 bureta.

Metodología

Reacción de Ninhidrina: en cada tubo, por separado, se colocaran 0.5 ml. De peptona, gelatina, albumina, tirosina y agua destilada, después se le agregaran a cada tubo 0.5 ml. de Ninhdrina, se deja reposar por 10 minutos para ver resultados.

Reacción Xantoproteica: se colocan los mismos estándares de la prueba anterior, también, en tubos por separado, pero ahora se le agregaran 0.5 ml. de HNO3, las soluciones de llevan a ebullición por 5 minutos a baño maría, después de deja reposar por 10 minutos y se le agregan algunas gotas de NH4OH para ver resultados.

Reacción de Biuret: se colocan los mismos estándares de la prueba anterior en tubos por separados, pero ahora la cantidad es de 1 ml. agregándolo a cada tubo 1 ml. de reactivo de Biuret, se observan resultados.

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