Practica 4: identificación y determinación de propiedades fisicoquímicas de las proteínas
Ana JaramilloTarea22 de Mayo de 2022
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Practica 4: identificación y determinación de propiedades fisicoquímicas de las proteínas.
Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales.
Espacio de Laboratorio de Bioquímica
Santiago de Cali, Colombia
Marzo 02 de 2022
Ana María Jaramillo - A00378230 Michell Mejía Cardona - A00377878
jaramilloana48@gmail.com , michell20042010@hotmail.com
Objetivos generales
Esta práctica tuvo como finalidad la distinción de proteínas en diferentes materiales para el análisis de sus propiedades fisicoquímicas por medio de distintas pruebas haciendo uso de algunos reactivos específicos que facilitaran su identificación.
Objetivos específicos
− Reconocer proteínas existentes en distintos alimentos para determinar sus cualidades químicas y físicas.
− Analizar las proteínas y sus características bajo distintos pH, además de la determinación de su solubilidad.
− Conocer el efecto de ciertos reactivos como el Biuret para la identificación de proteínas.
1. Resultados
La práctica se dividió en siete partes para realizarla de manera más eficiente y precisa.
I. Alimentos macerados
Inicialmente se pasaron por el macerador cinco alimentos distintos adicionándoles agua (salchicha, jamón, pescado, carne molida y caldo Maggie) para la colecta de muestra.
[pic 1]
Imagen 1. Carne molida macerada
[pic 2]
Imagen 2. Salchicha macerada
[pic 3]
Imagen 3. Pescado macerado
II. Solubilidad
Para la prueba de solubilidad de la albumina del huevo se emplearon tres tubos de ensayo con la solución A en iguales proporciones, pero bajo distintos parámetros. Uno de los tubos contenía agua fría, el otro agua caliente y el último hidróxido de sodio al 10%.
[pic 4]
Imagen 4. Solución A en agua caliente, agua fría e hidróxido de sodio al 10%
III. Pruebas colorimétricas
Para poder determinar la existencia de proteínas en los alimentos seleccionados, se realizó una prueba colorimétrica partiendo del reactivo Biuret, el cual funciona como un mecanismo de tinción que permite identificar la presencia de estas y su concentración de manera cualitativa.
[pic 5]
Imagen 5. Muestras colectadas de alimentos macerados con reactivo Biuret.
[pic 6]
Imagen 6. Solución A con reactivo Biuret.
IV. Prueba con sales minerales
Entre las funciones de las sales minerales se encuentra la regulación del pH, por lo que se utilizaron tres de ellas en la experimentación. Esto, con el objetivo de comparar el pH de la solución A en una dilución en presencia de estas sales y en su estado inicial.
[pic 7]
Imagen 7. Papel indicador universal de pH
[pic 8]
Imagen 8. pH de solución A con ácido acético al 10%
[pic 9]
Imagen 9. pH de solución A sin adicionar ningún reactivo.
Tabla 1. Soluciones y cantidades por agregar en cada tubo.
Solución | Tubo 1 | Tubo 2 | Tubo 3 | Tubo 4 |
Solución A | 2 mL | 2 mL | 2 mL | 2 mL |
Ácido acético 10% | 2 gotas |
| 2 gotas |
|
Cloruro de sodio saturado | 1 mL | 1 mL |
|
|
Cloruro de calcio 10% |
|
| 2 gotas | 2 gotas |
V. Efecto del calor
Para determinar la temperatura a la que la proteína precipitaba se tuvo en cuenta la solución A, un soporte para termómetro y una plancha de calentamiento, cerciorándonos de que el termómetro no tocara la base del vaso de precipitado que disponía de agua fue que se llevó a cabo el procedimiento.
[pic 10]
Imagen 10. Solución A en baño de agua.
VI. Efecto del alcohol etílico
Hay ciertos factores que conducen a la variación de las conformaciones de las proteínas (desnaturalización) y una de ellas es bajo agentes químicos como el alcohol. En este caso, se utilizó el alcohol etílico comercial para supervisar los cambios fisicoquímicos que se experimentan en la solución A.
[pic 11]
Imagen 11. Solución A acompañada de alcohol etílico.
VII. Determinación del punto isoeléctrico
Tabla 2. Tubos con diferentes soluciones amortiguadoras.
Tubo | Ácido acético 0.1 M | Cloruro de sodio 0.1M |
1 | 5 mL | - |
2 | 4 mL | 1 mL |
3 | 3 mL | 2 mL |
4 | 2 mL | 3 mL |
5 | 1 mL | 4 mL |
6 | - | 5 mL |
[pic 12]
Imagen 12-13. Disoluciones de leche en amortiguadores de acetato.
Para los tubos con mayor precipitación
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + ln ([pic 13])
(1) Ecuación de Henderson Hasselbach
Punto isoeléctrico ácido acético = 4.76
Punto isoeléctrico caseína = 4,6
Tubo 3
Ácido acético 3 mL
Acetato de sodio 2 mL
Volumen total = 5 mL
3 ∗ 10−4 𝑚𝑜𝑙
[𝐻𝐴] = 3 𝑚𝐿 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂𝐻 ∗ 0,1 𝑀 = −3 = 0,06 𝑀 5 ∗ 10 𝐿
− 2 ∗ 10−4 𝑚𝑜𝑙[pic 14]
[𝐴 ] = 2 𝑚𝐿 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎 ∗ 0,1 𝑀 = −3 = 0,04 𝑀 5 ∗ 10 𝐿
𝑝𝐻 [pic 15]
2. Análisis de resultados.
Como mencionamos en los objetivos al inicio del informe, a lo largo de la práctica se buscaba distinguir la cantidad de proteínas en diversos alimentos (carne molida, pescado, salchicha, leche, huevo, entre otros) identificándolas en diversos procesos como las pruebas colorimétricas, pruebas con sales minerales, efectos de calor y efectos del alcohol etílico. Para esto empezamos macerando los alimentos que lo necesitaban, como lo podemos observar en las imágenes 1,2 y 3 esto con la finalidad de hacer solubles nuestras proteínas. Esto se llevó a cabo con un mortero y agregándole 30mL de agua. En simultaneo otra persona del grupo tomo la gasa y filtro el huevo para crear la solución A, con la que se trabajó. En estas soluciones observamos: En la de huevo un líquido transparentoso y en el resto observamos como el agua se tiño casi siempre del color del alimento, ejemplo, rojo para la carne y rosa para la salchicha.
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