Precisión y Exactitud de micropipetas

Uso de micropipetas

Catalina Clavijo Agudelo1; Laura V Zuñiga Ochoa2; Cristian C Villalba Rey 3

1,2,3 Estudiantes del programa de Biología, Facultad Ciencias Básicas e Ingeniería, Universidad de Los Llanos, Villavicencio, Meta, Colombia

 RESUMEN

Todos aquellos errores que cometemos durante el pipeteo, tanto de manera sistemática como accidental, inciden directamente en la calidad de los resultados obtenidos durante el trabajo de un laboratorio. Se utilizaron dos micropipetas; azul (100-1000 µL) y  amarilla ( 20-200 µL) con el objetivo de identificar las posibles fuentes de error en las medidas obtenidas y  comprobar el correcto funcionamiento de las micropipetas. La pipeta de mayor capacidad fue más precisa mientras que la de menor capacidad fue más exacta, las medidas tomadas con la capacidad máxima de las pipetas disminuyo la precisión y exactitud de estas.. Se concluye que los factores que perjudican las mediciones de los volúmenes obtenidos van desde una mala calibración, manipulación y condiciones del laboratorio.

Palabras clave: Exactitud, precisión , pipeteo.

INTRODUCCIÓN

En el laboratorio hay una serie de operaciones básicas; pesar  los reactivos sólidos o  medir el volumen de un líquido, la correcta ejecución de estos determina la obtención de resultados analíticos fiables.

 La medida de volúmenes de los líquidos se puede llevar a cabo mediante diferentes instrumentos como buretas, probetas o pipetas. Estas últimas se pueden encontrar en distintos formatos, fabricadas con materiales diferentes y con tamaños muy diversos. Entre los diferentes tipos de pipetas encontramos las pipetas graduadas y aforadas, las pipetas Pasteur o las micropipetas. La técnica mediante la cual se dosifica un volumen de un líquido utilizando una pipeta se denomina pipeteo (Dharan, M. 2002). Cuando queremos medir y transferir pequeños volúmenes de un líquido, en el rango desde unos pocos microlitros a mililitros, es muy aconsejable el uso de micropipetas.

En este laboratorio se utilizaron instrumentos (micropipetas) diseñados para conseguir una alta precisión , exactitud en la medida y dosificación de líquidos. Para garantizar mediciones precisas y exactas es necesario evitar errores asociados a un manejo inadecuado y a un funcionamiento deficiente de estos instrumentos.

En el error sistemático incluyen error de observación, calibración imperfecta del instrumento e interferencia ambiental. En el error aleatorio son limitaciones de los instrumentos, factores ambientales y ligeras variaciones en el procedimiento. Estos errores se cometen durante la medida y dosificación de líquidos empleando una micropipeta están relacionados con el sistema de pipeteo y el instrumental utilizado, pero también con el manejo que hagamos del material. Para poder evitarlos, es necesario comprobar que el material empleado funciona conforme a las especificaciones y también que nuestro manejo de las micropipetas sea excelente.

MATERIALES Y MÉTODOS

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Figura 1. La micropipeta amarilla con un intervalo de 20-200 µL, azul con un intervalo de 100-1000 µL.

Para pipetear correctamente tuvimos en cuenta  las reglas básicas del pipeteo:

1. Selecciona la micropipetas y la punta en función de su volumen nominal
2. Selecciona el volumen a pipetear
3. Presiona el émbolo hasta el primer tope
4. Introduce la punta en la micropipeta en el líquido en posición vertical
5. Suelta el émbolo suavemente para absorber el líquido
6. Dispensa el líquido apretando hasta el segundo tope
7. Desecha la punta presionando el botón eyector

Se tomaron cinco medidas con cada pipeta y con tres volúmenes distintos; pipeta azul  100 µL (mínimo) , 500 µL (intermedio) , 1000 µL (máximo) pipeta amarilla 20 µL (mínimo) , 100  µL (intermedio) , 200 µL (máximo).

RESULTADOS

Se muestra el peso en gramos de cada una de las mediciones con las pipetas en las siguientes tablas, se debe tener en cuenta que 1g = 1000 µL. Para medir la precisión de las pipetas utilizamos la desviación estándar y el error relativo como medida de exactitud.  

Tabla 1. Test gravimétrico con pipeta de 1000µL

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Tabla 2. Test gravimétrico con pipeta de 200µL

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Se calculo el error relativo para cada una de las tres medidas de las pipetas con la siguiente ecuación:

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Donde  es el valor promedio y  es el valor de referencia (volumen nominal).[pic 5][pic 6]

El error relativo para las pipetas 1 y 2 es:

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; ; [pic 10][pic 11][pic 12]

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Figura 2. Error relativo según su capacidad, pipeta 1 (azul), pipeta 2 (amarilla).

El error relativo muestra cual de las medidas es más exacta (figura 2). En promedio la pipeta 1 fue más exacta y para ambas pipetas la capacidad media obtuvo la medida más exacta.

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Figura 3. Desviación estándar según su capacidad, pipeta 1 (azul), pipeta 2 (amarilla).

La desviación estándar muestra cuál de las medidas es más precisa (figura 3). La pipeta 2 (200µL) tuvo en promedio una desviación estándar menor, por tanto es mas precisa. Para ambas pipetas al usar la capacidad máxima la precisión fue baja.

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