Preguntas “Electroforesis de Agarosa”

Instituto Tecnológico de Tijuana

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Ing. Bioquímica

Bioquímica del Nitrógeno y Regulación Genética
Unidad II

Preguntas “Electroforesis de Agarosa”

01 de noviembre 2020

Preguntas

1.- ¿Qué es la electroforesis?

Es una técnica utilizada para separar el ADN, el ARN, o moléculas o proteínas

2.- ¿Para qué sirve la electroforesis?

Para analizar y caracterizar ácidos nucleicos de distintas procedencias. La técnica se realiza sobre unos geles que se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma.

3.- ¿Cuales son los materiales que se necesitan para realizar una electroforesis?

• Guantes
• Juego de micropipetas
• Microondas
• Cubeta de electroforesis
• Fuente de alimentación
• Captador de imágenes

4.- ¿Qué reactivos se utilizan?

Tampón TBE (5x)

Tampón de carga (6x)

Agarosa

Bromuro de Etidio

5.- Qué características tienen los tampones?

El tampón TBE 5x: 0.45M Tris base, 0.45M Ácido Bórico, 10 mM EDTA y se ajusta el pH a 8.

Tampón de carga 6x: 40% de sacarosa, 0.25% de azul de Bromofenol, 0.1M de EDTA

6.- Factores que ralentizan la migración del ADN en el gel:

1. Tamaño de la molécula
2. Concentración de agarosa
3. Conformación de ADN

7.- ¿Para qué sirve el peine?

Para generar los pocillos donde entra la mezcla.

8. ¿Cuál es la función del tampón de carga?

Aumentar la densidad de la muestra y permite ver el avance del gel debido a su tintura azul.

9.- Definir los pasos para realizar una electroforesis:

• Pesar la agarosa y disolver en los volúmenes adecuados de tampón TBE.
• Se calienta en el microondas hasta ebullición.
• Se vierte la solución en un porta geles.
• Después se cargan las muestras añadiendo el tampón de carga.
• Cuando solidifica el gel que estaba en el porta geles se le retira el peine y se pone en la cubeta de electroforesis.
• Se agrega a la cubeta tampón TBE hasta cubrir todo el gel.
• En los pocillos que se le hicieron al gel se irán agregando las mezclas que estaban en las micropipetas
• Una vez teniendo todas las mezclas en los pocillos, se establece una corriente en la cubeta de electroforesis de manera que el ADN de desplaza del polo negativa hacia el positivo.
• Una vez desplazando el ADN se tiene que teñir de un colorante que se une al ADN.
• La tinción dura de 10 a 15 min y es necesario llevar al gel a una luz ultravioleta para que el colorante emita fluorescencia y sea posible detectar los fragmentos de ADN

10.-  ¿Cómo saber los tamaños de los fragmentos de ADN?

Por comparación con un patrón de tamaños conocidos podemos saber el tamaño de los de nuestra muestra.

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