Pruebas microscópicas de esperma

MATERIALES Y METODOS

Tabla.1 Materiales y Reactivos

Se siguió la siguiente metodología:

1. PRUEBA MICROSCÓPICA:

a. Si la mancha se encuentra sobre materiales no absorbentes, proceder a raspar la mancha con un bisturí y colocar sobre portaobjetos.

b. En el caso de materiales absorbentes ubicar las manchas colocando bajo la lámpara UV aparece mancha fluorescente verdoso

c. Cortar un fragmento de la tela manchada de 0.5 x 0.5 cm.

d. Colorar la muestra tomada sobre 2 portaobjetos (la mancha de la tela debe estar en contacto con el portaobjeto), colocar unas gotas de solución salina o agua destilada.

e. Colocar las placas en la cámara húmeda previamente saturada por 15 min. Y dejar en contacto por 10 min

f. Apretar con una varilla la tela sobre el portaobjetos para permitir desprenderse la mancha y adherirse al portaobjetos y retirar el trozo de tela

g. En la una placa colocar un cubreobjetos y observar al microscopio

h. La otra placa fijar la placa al calor (37°C) colorear con R. Gram y/o hematoxilina eosina

i. Observar al microscopio con 100 x

“Al microscopio se observa a los espermatozoides con o sin colas, la cabeza de color morado más intenso que la cola.”

2. PRUEBAS MICROCRISTALOGRAFICAS:

a. Si la mancha se encuentra sobre materiales no absorbentes, proceder a raspar la mancha con un bisturí y colocar sobre portaobjetos.

b. En el caso de materiales absorbentes ubicar las manchas colocando bajo la lámpara UV aparece mancha fluorescente verdoso

i. Recortar la mancha de aprox. 0.5 x 0.5 cm

ii. Colocar en un tubo de ensayo y añadir 1 ml de solución salina

iii. Dejar en reposo por 30 min, con movimientos suaves que permitan el desprendimiento del material biológico

iv. Retirar el fragmento de tela con una pinza

v. Centrifugar por un minuto a 10 000 rpm

vi. Retirar el sobrenadante con una pipeta Pasteur

vii. El sedimento colocar sobre dos placas portaobjetos

c. Cubrir con láminas cubreobjetos

d. En el borde del cubreobjetos colocar una gota del reactivo diferente en cada placa: R. de Neiderland, R. de Florence

e. Dejar que por capilaridad se unan los reactivos con la muestra.

f. Dejar en reposo de 30 a 60 min para que se produzca la cristalización

g. Observar al microscopio.

i. R. Neiderland: en caso positivo se presentan cristales en forma de agujas transparentes

ii. R. Florence: en caso positivo se presentan cristales de yoduro de colina de color café.

RESULTADOS

Tabla.2 Resultado de análisis

En las pruebas microscópicas del material absorbente donde se encontraba la muestra se observaron espermatozoides que variaban en su estructura, algunos tenían cola y otros no, por medio de la coloración se diferenció la cabeza de la cola que se encontraba de un color azul-morado intenso.

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