Suspensiones lavadas de Escherichia

E.coli

Suspensiones lavadas de Escherichia coli oxidan succinato cuando previamente crecido en succinato pero no en glucosa. Un ritmo más lento de la oxidación se produjo con bacterias cultivadas con peptona como fuente de carbono. Estas diferencias se deben a alteraciones en el nivel de actividad de la succinato deshidrogenasa. La glucosa reprime la biosíntesis de la enzima, mientras que el succinato actuó inductor lo más específico y no aumentó la actividad de hidratasa fumarato, malato deshidrogenasa o NADH deshidrogenasa.

Crecimiento aeróbico también aumenta los niveles de membrana succinato deshidrogenasa genase. La inducción de la succinato deshidrogenasa por succinato siguió el agregado cinética esperados. La adición de glucosa causó una disminución en la tasa de biosíntesis de succinato deshidrogenasa. Succinato deshidrogenasa parece jugar un papel importante, ya que amital respiratoria (un inhibidor de NADH-oxidasa) inhibió el crecimiento sólo ligeramente cuando se utilizó succinato como fuente de carbono en comparación con la fuerte inhibición del crecimiento cuando se usó glucosa como fuente de carbono.

Introducción

Succinato deshidrogenasa es la única enzima unida a la membrana del ácido tricarboxílico ciclo en Escherichia coli (Marr, 1960) y, por lo tanto, puede participar en la respiración además de funcionar en el ciclo del ácido tricarboxílico. Los cambios en el medio ambiente puede ponerse en secuencia afectar tanto a la actividad respiratoria y el funcionamiento del ciclo del ácido tricarboxílico.

Influencia de las condiciones de crecimiento sobre la biosíntesis y la actividad de la membrana limite unido a la membrana hidrogenasas y citocromos de bacterias está bien documentada (Gray, Wimpenny y de musgo hombre, 1966; Cavari, Avi-Dor y Gressowicz, 1968; Rufz-Herrera & De MOSS, 1969).

Los estudios preliminares (RubHerrera, 1968) han sugerido que el sustrato de crecimiento de carbono era importante en el gobierno de la síntesis de la succinato deshidrogenasa en E. coli. este estudio presenta nuevos datos sobre los mecanismos que controlan la biosíntesis de succinato deshidrogenasa en esta bacteria.

METODO

Organismo y las condiciones de crecimiento: Escherichia coli HfrH, obtenido de JA de MOSS, Universidad de California, San Diego, EE.UU., se mantuvo en agar nutritivo (Difco) y se cultivaron en el medio descrito por Sypherd y Strauss (1963) con 5 pug de thiaminelm1 y, o bien I% 0,5% glucosa o succinato. Este medio se conoce como 'medio sintético'; por medio complejo ', caldo nutritivo (Difco) al 0,4%, se añadió. Las bacterias se cultivaron a 37 "C durante 4 a 5 h, el medio se roció con aproximadamente 2 volúmenes de aire estéril / volumen de cultivo / min. Para las condiciones anaeróbicas, los cultivos se roció con una mezcla de 95% de N2 + 5% COz. Densidad bacteriana se midió por medio de un fotocolorímetro Klett utilizando un filtro verde y el contenido de proteína se calculó a partir de la turbidez con una curva de calibración apropiada.

Preparación de extractos libres de bacterias y sobres bacterianas. Las bacterias se centrifugaron, se lavaron con tampón 0,05 wphosphate, pH 7,3, y se rompieron con un 10 kHz Branson Sonifier (Heat Systems Ultrasonics, Plainview, Nueva York, EE.UU.) durante tres períodos sucesivos de 15 s cada uno. El extracto se centrifugó a 4008 durante 15 min y el sobrenadante se utiliza como extracto crudo. Sobres bacterianas se aislaron por resuspensión de las bacterias en 0,5 ml de tampón 0,05 M-HCl-Tris, pH 8,3, que contiene 20% de sacarosa y 2 mg de lisozima (Sigma Chemical Co. Inc., St Louis, Missouri, EE.UU.) y se congelaron en Jml una mezcla de acetona-C02 sólido. Después de descongelar a 37 "C, el tratamiento se repitió cuatro veces. Cinco ml de tampón de fosfato 0,05 M-10 que contienen DNasa pg (Sigma Chemical

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