Técnicas Asépticas y Tinción de Gram

Universidad Bernardo O’Higgins

Laboratorio de Microparasitología

Laboratorio 1: Técnicas Asépticas y Tinción de Gram.

Integrantes: Darling Folch M.

María Jesús Roca N.

Sebastián Urriola P.

Sección:

Profesor:

Fecha de Entrega: Viernes 4 de Septiembre, 2015

Introducción

La obtención de resultados confiables en el Laboratorio de Microbiología implica cumplir el Reglamento establecido, trabajar dentro de una zona aséptica y realizar la manipulación del material estéril siguiendo la técnica aséptica. La importancia los dos últimos aspectos radica en eliminar del riesgo de contaminación del cultivo de estudio así como la protección del personal que realiza la acción. (1).

En 1884, un bacteriólogo danés, Christian Gram, desarrolló una técnica de tinción que permite separar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas, basados en si retienen o no, el colorante primario (cristal violeta) luego del proceso de decoloración. Los organismos que retienen el cristal violeta luego de la adición del agente decolorante, el alcohol, aparecen como azul oscuro o violeta, y se designan como Gram positivos; aquellos que pierden el cristal violeta y se tiñen con el colorante secundario, la safranina, aparecen como rojos y se designan como Gram negativos.

Un examen minucioso de un extendido bacteriano teñido diferencialmente, provee una información muy importante sobre la caracterización morfológica e identificación de la muestra. Por ejemplo, una reacción positiva o negativa a la Tinción de Gram es sumamente importante como medio primario de clasificación. (2)

Objetivos

Los objetivos que se esperan lograr son:

1. Reconocer el material de laboratorio utilizado para este práctico.

2. Proporcionar un ambiente aséptico para manipular las muestras y asegurar su “esterilidad”.

3. Realizar la Tinción de Gram de acuerdo a los pasos pre establecidos.

4. Reconocer morfología bacteriana.

5. Documentar los resultados obtenidos.

Objetivos de Preferencia

Los objetivos de preferencia es lograr realizar en forma aséptica y manteniendo las condiciones de esta, el cultivo de diferentes bacterias y determinar con la técnica de tinción de Gram la clasificación morfológica de la bacterias según las características específicas que poseen estas.

Procedimiento Experimental

Se comenzó limpiando el área de trabajo con alcohol de 70°, luego se encendió el mechero Bunsen creando un ambiente semiestéril de aproximadamente 30 cm a la redonda de este mechero. Posterior a esta condición aséptica se procedió a la esterilización de la Asas bajo la llama del mechero para luego poder recoger una muestra de Colonias de bacterias (Staphylococcus Aureus) puestas en una Placa Petri. Todo este procedimiento se realizó en un ambiente semiestéril de 30 cm a la redonda.

Se procedió a depositar la muestra de bacteria en un porta objeto limpio previa deposición de 1 a 2 gotas de suero fisiológico en la cual fue esparcida la muestra para luego colocar 2 gotas de Cristal Violeta por un tiempo de 1 minuto aproximadamente. Luego a esto se aplico 2 gotas de una solución de Lugol por un tiempo de 1 min, se aplico 2 gotas de alcohol – acetona por un período de 30 segundos, se lavó con agua el resto de la muestra y se administro el último colorante llamado Safranina alrededor de 1 min, procediendo colocar un cubre objeto sobre la muestra. Se logro secar la muestra agitando lentamente sobre la llama del mechero, finalmente de procedió a la observación bajo el Microscopio Óptico con un aumento de 40x. (4)

Resultados

Los resultados obtenidos del cultivo de bacterias sometidos a tinción de Gram fueron los siguientes: Se observó al microscopio óptico con un aumento de 40x, colonias de color violeta-azul que corresponden a Gram + y colonias de color rosado de bacterias

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