Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital

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Bacteriología clínica

Dra. María del Carmen Vega Menchaca

Urocultivó

Integrantes:

• Cristopher Loza Ramos
• José Tomás Barraza Valdez
• Eduardo Obed Torres Limón
• Erick Roberto Villarreal Camacho
• Oswaldo Jovany Sifuentes Campos

Grado: 5to semestre                        Sección: “B”

Gómez Palacio Durango                                            19/11/15

Introducción:

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones.

La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped.

En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos.

El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

Material:

Método:

1.- Se tomara con un hisopo muestra, tratando de escurrirlo en las paredes del recipiente y se colocara el inoculo en el agar sangre y McConkey.

2.- Con el asa bacteriológica se sembrara por el método de estría cruzada.

3.- Se meterán los medios de cultivo a la incubadora. Meter en la incubadora 24-48 horas a una temperatura de 37° C.

4.- Se rotularan 3 tubos de ensaye para hacer diluciones en el Agar de tripticasa soya. En los tres tubos se colocaran 9 mililitros de agua destilada.

5.- En el tubo 1 se colocara un mililitro de la muestra de orina y se mezclara con el agua destilada ya depositada ahí, y este será la disolución 1:10. Después se tomara 1 mililitro del tubo 1 y se depositara en el tubo 2, mezclándolo con el agua destilada ya depositada, este tubo quedara rotulado como la mezcla 1:100, finalmente se tomara 1 mililitro del tubo dos y colocara en el tubo 3 para pasar a mezclarlo con el agua que ya está depositada, este tubo quedara rotulado como la mezcla 1:1000.

6.- Se tomaran 3 cajas Petri y rotularan cada una de ellas como 1:10, 1:100 y 1:1000 para que  con ayuda de la micro pipeta se tomara 1 mililitro de cada uno de los tubos correspondientes para colocarlos en las placas.

7.- Ya que las cajas Petri contengan su mililitro de cada una de las muestras de los tubos se pasara a colocar el agar de tripticasa soya y se mezclara para que todo el medio quede uniformemente. Moverlo en forma de 8.

8.- Colocar cada una de las cajas Petri en la incubadora durante 24-48 horas a una temperatura de 37° C.

24- 48 horas después de la primera parte de la práctica.  

9.- Observar y reportar cada una de las colonias en el agar sangre y McConkey, mientras que en las cajas de agar de tripticasa de soya realizar el conteo de kass.

10.- Realizar una tinción de Gram tanto en el medio de Agar sangre y McConkey.

Tinción Gram

1. En un porta objetos con ayuda de un asa bacteriológica colocar una muestra de una colonia del medio y fijarla con ayuda del mechero.
2. Después de que la muestra haya sido fijada cubrir el porta objetos de cristal violeta durante 1 minuto y después enjuagar.
3. El siguiente paso será cubrir el portaobjetos de lugol durante 1 minuto y después de eso enjuagar.
4. El siguiente paso de la tinción será colocar basta cantidad de alcohol acetona durante 30 segundos y después de este tiempo enjuagar.
5. Después se cubrirá el portaobjetos con safranina durante 1 minuto y enjuagar, después secar el porta objetos con movimientos, es importante no limpiarlo si no dejar secar por si solo.

11.- Observar al microscopio las tinciones realizadas y reportar.

12.- Se realizaran las pruebas bioquímicas para la identificación de la bacteria.

1. Kligger (rojo)

Se pica hasta el fondo y estría la superficie

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