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Determinación De La Actividad Enzim á Tica De Peroxidasas (catalasa


Enviado por   •  26 de Mayo de 2013  •  1.247 Palabras (5 Páginas)  •  953 Visitas

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DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE PEROXIDASAS

(CATALASA)

Cedillo Jiménez, C.A.

1

; Hernández López, J.L.

2

.

1

Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de Querétaro.

2

Centro de Investigación y Desarrollo Tecnológico en Electroquímica.

RESUMEN

Se determino la actividad enzimática de la catalasa en una muestra de sangre fresca, variando

condiciones de pH (tres niveles: 4.96, 6.94 y 9.04) y de concentración de sustrato (siete

niveles: 0.0042, 0.0083, 0.0166, 0.0332, 0.0415, 0.0498 y 0.0664

M), titulando con

permanganato de potasio el peróxido de hidrogeno remanente. Se encontró diferencia

significativa entre ambas variables (pH y concentración de sustrato). Se encontró que a mayor

concentración de sustrato (en el intervalo de concentracione

s manejadas), el efecto en la

velocidad era positivo; entre pH 6.94 y 9.04 se encontró mayor efecto en la velocidad, el pH

4.96 se mantuvo debajo de ambos niveles. Se trato la enzima como si ésta se ajustara a un

perfil de Michaelis

-

Menten y se estimaron l

os parámetros cinéticos usando ajustes lineales

ponderados por el arreglo de Lineweaver

-

Burk y Hanes. Se encontró que la catalasa no se

ajusta a un perfil Michaelis

-

Menten, por ello es necesario estimar los parámetros con el patrón

adecuado.

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son proteínas con capacidad de catalizar reacciones biológicas. Igual que los

catalizadores inorgánicos, aumentan la velocidad para alcanzar el equilibrio de la reacción. El

mecanismo por el cual las enzimas incrementan la velocidad de la reacc

ión es reduciendo la

energía libre de activación requerida para la transformar un sustrato al producto

correspondiente, sin afectar la constante de equilibrio.

La actividad de una enzima se evalúa en función de la velocidad de la reacción. La cinética

enzimática

estudia la velocidad de la reacción, los factores que la modifican y el mecanismo

de la misma. Los factores fisicoquímicos que modifican la actividad de la enzima son:

concentración del sustrato, concentración de la enzima, pH, temperatura, fuerza iónica,

inhibidores.

Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, propusieron un modelo clásico para el estudio de

la cinética enzimática. Este modelo consiste en graficar la velocidad de la actividad

enzimática y la concentración del sustrato. Esta representación gráf

ica permite determinar la

constante de Michaelis

-

Menten (K

M

) al interpolar la mitad de la velocidad máxima (V

máx

).

En esta práctica se emplear

á la enzima catalasa

para analizar algunos aspectos de la cinética

enzimática.

La catalasa u

tiliza una molécula de

peróxido de hidrógeno (H

2

O

2

) como sustrato

donador de electrones y otra molécula de H

2

O

2

como oxidante o aceptor de electrones.

Donde:

A y B

= Sustratos

C y D

= Productos

v

1

= Velocidad de

reacción para formar productos

v

2

= Velocidad de reacción para formar reactivos

v

1

v

2

CATALASA

2 H

2

O

2

2 H

2

O

+ O

2

La catalasa está

contenida en los peroxisomas de eritrocitos, médula ósea, mucosas, riñón e

hígado. Su función es la descomposición del H

2

O

2

...

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