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FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS EN SUS PRINCIPALES CONSTITUYENTES

Objetivos.

 Determinar la presencia de biomoléculas, tales como lípidos, proteínas y carbohidratos en los diferentes tejidos, mediante la utilización de reacciones de identificación.

 Comparar los tejidos identificados respecto a sus componentes principales

 Determinar en que órganos se encuentra la mayor cantidad de cada una de las biomoléculas, para así identificar la función metabólica e histológica del órgano, respecto a tales moléculas.

Análisis de resultados

El análisis del laboratorio se realizo con base en los datos reportados en las tablas de datos de cada uno de los órganos estudiados, respecto a la información obtenida en el marco de referencia

A continuación se muestra la interpretación de cada uno de los resultados en cada órgano analizado.

Hígado.

Para la identificación de carbohidratos en el hígado se realizó cuatro tipos de pruebas con diferentes reactivos: Lugol, Lugol + HCL, Molisch y Benedict.

En el hígado, los resultados obtenidos se corresponden directamente con la información metabólica de este órgano, las pruebas realizadas con los reactivos de lugol, Molisch y Benedict fueron positivas para cada uno de los compuestos que identifico. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

En primer lugar la prueba de lugol reconoce la presencia de polisacáridos por medio de la coloración de estos compuestos por el complejo de yodo, el color rojo obtenido corresponde a la presencia de glicógenol (Departamento de ciencias bàsicas. 2005), forma en la que este órgano guarda reservas energéticas de rápido consumo en sus células. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

Las reacciones de Molisch y Benedict identificaron correctamente los carbohidratos encontrados en los hepatocitos. (Plumier D.T. 1981) El primero de ellos reconoce carbohidratos en general, y la coloración de un anillo rosado corresponde a la presencia de monosacáridos. El segundo de ellos reconoció carbohidratos con capacidad reductores. (Departamento de ciencias básicas. 2005) Debido a esto es posible afirmar que el carbohidrato que más se reconoció en este órgano fue la glucosa (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000), un monosacárido con la capacidad de reducirse por poseer a un aldehído como grupo funcional. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

Se cree que fue la glucosa el carbohidráto reductor encontrado en el hígado, porque éste posea una concentración alta de esta azúcar ya que es la principal fuente de síntesis y de rutas metabólicas en el hígado para la formación de otros tipos de compuestos que sean útiles para otro tipo de tejidos y exportarlos así por el torrente sanguíneo. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

Respecto a la prueba de molish, al presentarse la reacción, se identificaron todo tipo de carbohidratos, ya que esta prueba se basa en la acción deshidrolizante y deshidratante del ácido sulfúrico en donde este cataliza la hidrólisis de los enlaces de la muestra y la deshidratación a furfural y a hidroximetilfurfural, compuestos que solo pueden ser formados en presencia de carbohidratos pues estos son los que poseen aldehídos y cetonas capaces de desenlazarse y deshidratarse. Luego de esto, el alfa naftol del reactivo de molish, provoca una condensación de los anteriores productos, lo que genera por peso un anillo de coloración rosada, color dado por tal condensación. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

Respecto al reactivo de benedict, se pudo ver que reaccionaba con los carbohidratos únicamente reductores, lo que indica que reacciona con la parte reductora del azúcar, es decir con el grupo carbonilo libre. La reacción se basa en la capacidad del carbohidráto de reducir al cobre en un medio alcalino, si esto sucede, el Cu+1 se oxida a Cu2O precipitándose, indicando que la reacción fue positiva dando un color rojo, expulsado por el cobre precipitado. Si los carbohidratos no fueran reductores, posiblemente la reacción no presentaría la coloración roja, pero como en este caso, fue tan evidente que no solo dio un color rojo sino verde oscuro, lo que indica que hay gran cantidad de azúcares reductores (Departamento de ciencias básicas. 2005) y como se dijo anteriormente, se piensa que tal carbohidratos es la glucosa, la cual es la más abundante en este órgano. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

La identificación de los lípidos se llevo a cabo por dos tipos de procesos que involucran diferentes reactivos.

El primero de ellos corresponde a la utilización de cloroformo, anhídrido acético y acido sulfúrico. El resultado obtenido corresponde a la presencia de colesterol en los hepatocitos, este tipo de lípidos se reconoció por la presencia de una coloración característica de la reacción tal como rojo o verde. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

Para esta reacción, se esperaba encontrar gran cantidad de colesterol (Departamento de ciencias básicas. 2005), el problema radico en que la reacción es poco sensible, lo que provocó que la presencia de esta molécula fuera en poca concentración, de éste modo la coloración presentada fue muy baja, y casi imperceptible, por ende no se podría saber con claridad si en este órgano la presencia de tal molécula es en altas concentraciones o no. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

El segundo tipo de prueba llevada a cabo fue la de saponificación, en la cual los triglicéridos, especialmente los triesteres, reaccionan con una base como el NaOH formando una sal de ácidos grasos y glicerina, evidenciándose en general por la formación de espuma en la muestra. (http://es.geocities.com/qo_22_acidoscarb/)

Estos resultados positivos se deben principalmente a que en el hígado también se llevan a cabo procesos metabólicos de los lípidos, los ácidos grasos que componen estas moléculas son capaces de reaccionar con NaOH formando su respectiva sal como se dijo anteriormente. (http://es.geocities.com/qo_22_acidoscarb/)

Se presencio alta concentración de lípidos ya que la formación de espuma fue en abundancia, por ende se creería que los lípidos existentes en este órgano fueron triglicéridos y fosfolípidos, los cuales eran principalmente de membrana y en forma de reservas energéticas. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

Para las pruebas de proteínas se realizaron dos tipos de identificación de las moléculas específicas. La primera corresponde a la reacción con el reactivo de Millon y la segunda a una reacción generada con la Ninhidrina.

Al igual que los lípidos y los carbohidratos, los aminoácidos tiene diversas rutas metabólicas en el hígado, algunas de ellas incluyen la formación de nuevas proteínas y otros compuestos nitrogenados como hormonas y nucleótidos. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

La primera reacción, la del millón, se basa en que los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido, se condensan con el grupo fenólico presente, como es el caso de la tirosina, formando un compuesto de color rojo ladrillo (Departamento de ciencias fisiológicas. 2001), tal coloración se vio que en el hígado, hecho determinado por que la mayoria de las proteínas poseen el compuesto fenólico de la tirosina, por ende, si el reactivo del millón tiene con quien reaccionar, las prueba será positiva, como resultó en este caso. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000)

En este órgano se presentan proteínas ya que estas poseen una gran variedad de funciones como las síntesis de otros compuestos, la formación estructura, y la síntesis de hormonas y nucleótidos además de ser degradas para funcionar en le ciclo del ácido cítrico. (Nelson L.D. & Cox M.M. 2000) estas características, y lo dicho en el párrafo anterior, corroboran con la existencia de proteínas en el hígado.

La segunda prueba corresponde específicamente a la reacción de aminoácidos libres o enlazando formando polímeros como alfa-aminoácidos, este resultado era de esperarse debido a la presencia de este tipo de compuestos en las células del hígado. (Departamento de ciencias básicas. 2005). Esta reacción se lleva a cabo mediante el calentamiento excesivo donde los aminoácidos, por cualquiera que sea, reaccionan con la nihidrina formando dióxido de carbono, amoniaco y un aldehído que contiene un átomo menos que el compuesto original, generando una coloración azulosa con violeta. (Departamento de ciencias básicas. 2005)

Para esta reacción, como había presencia de aminoácidos, fue positivo el resultado, con presencia de tales coloraciones, más específicamente, morada, ya que al haber aminoácidos, las ninhidrina va tener con quien reaccionar formando la coloración.

Ahora bien, dentro de las diferentes concentraciones de biomoléculas en el hígado, se puede denotar que las más alta concentración esta dada por las proteínas, con 19,7 gr por cada 100 gramos de órgano mientras que las grasas son de 3,1 gr y los carbohidratos de 1,7 gramos, de lo que se induce que por ello, las reacciones de identificación de proteínas dieron altamente coloreadas, mientras que las de carbohidratos aunque fuero notorias, fueron menos coloreadas pues dio rosado, en vez de rojo-violeta, y para el caso de los lípidos o grasas, aunque dio positiva, no fue tan concentrado pues de esta biomolécula no hay en tan altas cantidades en el órgano. (……)

Para el caso del colesterol, a parte que la reacción de identificación fue poco sensible,

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