El método de criopreservación así como el procedimiento de descongelación

[pic 1][pic 2]Universidad de sonora

   División de ciencias biológicas y de la salud

Departamento de ciencias químico biológicas

Lic. Químico Biólogo Clínico

Laboratorio de integración básico

Biología celular

Reporte de laboratorio

Pràctica 6

Criopreservación de líneas celulares

Descongelación y cultivo celular  

Armenta Plasencia Guadalupe

Gutiérrez Aguilar Ilse

Sánchez flores Gabriela  

Valenzuela García Laura

Hermosillo sonora a Noviembre de 2015

OBJETIVO

Conocer el método de criopreservación así como el procedimiento de descongelación de líneas celulares que se encuentran en criopreservación además de las medidas de seguridad y esterilidad que se deben de tener al tratar con líneas celulares.

INTRODUCCIÓN

La criopreservación es el método donde se utilizan bajas temperaturas con el fin de preservar las estructuras intactas de las células vivas. Las células se criopreservan para evitar pérdidas por contaminación, para minimizar cambios genéticos en líneas continuas y evitar la transformación en líneas finitas. Una criopreservación exitosa de células requiere seguir protocolos estandarizados y reproducibles, aunque cada protocolo puede requerir modificaciones según el tipo celular o línea a usar, para lograr la máxima viabilidad después del descongelamiento. Las células de mamíferos criopreservadas incluyen líneas celulares inmortalizadas, células primarias aisladas a partir de tejidos y células madre. Las células de mamíferos se congelan comúnmente con un criopreservante. Generalmente la preparación del criovial (o también llamado criotubo), se lleva a cabo bajo condiciones asépticas en una campana de cultivo de células. Las suspensiones celulares suelen ser mantenidas frías (0,5 a 4,0 °C), la criopreservación de células requiere una velocidad de congelamiento controlada de -1°C por minuto para la mayoría de los tipos celulares. La congelación se puede realizar en un congelador de reducción de temperatura programada, en un congelador de -80°C ó en un contenedor de hielo seco con un recipiente de congelamiento pasivo a velocidad controlada.

RESULTADOS

Concentración celular = [pic 3]

Concentración celular =                 [pic 4]

Concentración celular = 6, 175,000 cel. /mL

Viabilidad celular = [pic 5]

Viabilidad celular =[pic 6]

Viabilidad celular = 40.81%

[pic 7]

DISCUSIÓN

 Las células se pueden preservar por largos periodos de tiempo por medio de la Criopreservación, la cual consiste en la disminución de las funciones de la célula, lo cual es posible por medio del congelamiento por nitrógeno líquido, de esta manera se mantienen las células en condiciones de vida suspendida.

La viabilidad de las células se mantiene durante el congelamiento debido a que se utiliza agentes que deshidratan rápidamente la célula así de esta forma al ser congeladas el agua no provocará la formación de cristales de hielo lo cual dañaría seriamente a la células.

CONCLUSIÓN

Las células viables obtenidas al final de la práctica confirman que se cumplió el objetivo, ya que se realizó satisfactoriamente la preservación celular, puesto que no se observaron células no viables.

En el conteo celular se tuvo un 40.81% de viabilidad.

ACTIVIDADES Y PREGUNTAS

1.- Investigue otros procedimientos para la preservación de células incluyendo microorganismos.

Los procedimientos de preservación de microorganismos se dividen en 3 categorías, de acuerdo al tiempo en que las células permanecerán viables.

A corto plazo, un método común es el subcultivo; que consiste en el repique periódico del cultivo en un medio nutritivo fresco. Una vez desarrollados los cultivos, se mantienen a 4⁰C durante lapsos que van entre 15 días y dos meses. Sin embargo esta técnica presenta algunos inconvenientes, entre los cuales están: Incremento de la posibilidad de mutación con cada transferencia, riesgo de contaminación y alteraciones en el medio de cultivo.

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