La enzima alfa-amilasa

INTRODUCCION

Se puede identificar la estructura química y los factores que afectan la actividad enzimática mediante esta práctica de laboratorio. La enzima alfa-amilasa puede ser obtenida a partir de saliva humana o a partir de granos de cereales germinados macerados en agua.

Dado que el almidón esta integrado por dos fracciones: la amilosa y la amilopectina, debe tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (así como sus respetivos productos de hidrolisis) con el reactivo de lugol.

OBJETIVO

Aprender a comparar y sacar resultados de las muestras de enzimas en las tres diferentes prácticas de laboratorio.

Observar los cambios que hay en la muestra cuando se le agrega un reactivo.

MATERIALES

 Pizetas de agua destilada

 Vasos de p.p. de 250 ml

 Espátula

 Matraz de 250 ml

 Vidrio de reloj

 Vaso de p.p. de 50ml

 tubos de ensayo

 Gradilla

 Termómetros

 Vaso de p.p. de 1l

 Soporte y anillo

 Tela de asbesto

 Mechero

 Pipetas de 5 ml

 Pipeta de 10 ml

 Propipetas



SOLUCIONES

 Almidón soluble

 Reactivo de benedic

 Sulfato de amonio

 Lugol

 Solución de almidón

 Acido tartárico

 Ácido cítrico

 Agua oxigenada

 Búfer amarillo

 Búfer rojo

 Búfer azul

MUESTRAS

 Amilasa salival

 Plátano

 Papa

METODOLOGÍA

PRACTICA AMILASA SALIVAL:

 Colocamos un termómetro en un vaso de hielo, uno a temperatura ambiente y otro a una temperatura de 60°

 Esperamos aproximadamente 30 min en cada uno para tomar la temperatura adecuada

 Tomamos 3 tubos previamente cada uno ya tenia una solución de almidón al 50% y 1ml de saliva

 Se colocaron 3 en el hielo

 3 en temperatura ambiente

 3 en el agua a una temperatura de 60°c

 Dejamos reposar cada tubo en diferentes temperaturas 30 min.

 Ya cumplidos los 30 min dejamos todos en una solo recipiente a una misma temperatura y guardado en un refrigerador.

PRACTICA DE PH

 Ya teniendo la solución preparada y los tubos de ensayo anteriormente preparado y ambos a diferentes temperaturas procedíamos a realizar la prueba del pH para determinar a qué temperatura reaccionaba la enzima de amilasa salival

 En 10 t

 unos fueron colocadas distintas soluciones ejemplo 9 de agua 1 de sulfato de amonio y así sucesivamente.

 En otros 3 tubos se le agrego 1 ml de saliva y 5 ml de solución de almidón y 10 ml de búfer azul, otro amarillo, y otro rojo.

 A los tubos se les agrego lugol para notar cual había sido el que mejor reacciono

 Notamos que fue el de 5x5+2

 A continuación utilizamos los 3 tubos con búfer se dejaron reposar y los utilizamos para verificar en cuál de los tubos reaccionaba mejor a estos se le agrego reactivo de benedic para notar en el cual de los 3 colores reacciono mejor.

 Los resultados fueron el 7x3+2.

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

 se tomaron 30 tubos de las distintas soluciones en total fueron 90 tubos

 colocamos ácido tartárico, ácido cítrico y agua oxigenada ambos preparados al 50%

 en cada de uno de los tubos de los 30 tubos de las distintas soluciones se les agrego plátano y papa

 se dejaron reposar durante 30 min

 para observar que era lo que pasaba con cada uno de los tubos

...