Tincion De Sudan

TINCIÓN SUDAN

El sistema de tinción Sudan Black B de Sigma-Aldrich se utiliza en la demostración istoquímica de gránulos neutrófilos en frotis de sangre o médula ósea. El sistema de tinción Sudan Black B es para uso diagnóstico in vitro.

Varios lípidos, incluyendo los fosfolípidos, las grasas neutras y los esteroles, se tiñen intensamente con Sudan Black B. La reacción de los gránulos neutrófilos con el tinte fue descrita por Sheehan y Storey en 19471. Generalmente, el patrón de tinción leucocitaria de Sudan Black B es parecido al de la mieloperoxidasa2. Las células que se encuentran a lo largo de las vías linfáticas muestran una tinción negativa, mientras que las formas mieloides y monocitoides muestran las reacciones positivas características. Por lo tanto,

Sudan Black B está considerado como un auxiliar útil en la identificación de las leucemias mielocíticas y mielomonocíticas2.

Los métodos antiguos utilizaban una fijación de vapor de formaldehído en los frotis de sangre2, técnica que puede dar como resultado una pérdida celular y artefactos de tinción.

El procedimiento de Sigma-Aldrich utiliza un fijador de glutaraldehído tamponado y un tiempo de incubación más corto, lo que da como resultado una excelente tinción sin pérdida celular ni distorsión3.

REACTIVOS

REACTIVO DE TINCIÓN SUDAN BLACK B,

Sudan Black B, 0,18 % (p/v), en 69 % de etanol y con fenol tamponado con fosfato.

SOLUCIÓN DE HEMATOXILINA, GILL Nº 3, número de catálogo GHS-3

Hematoxilina certificada, 6 g/l, yodato sódico, 0,6 g/l, sulfato de aluminio, 52,8 g/l, y estabilizante.

SOLUCIÓN DE GLUTARALDEHÍDO,

Glutaraldehído, 4 % en tampón borato, pH 7,6.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacenar el reactivo de tinción Sudan Black B a temperatura ambiente (18–26 °C).

La etiqueta del reactivo indica la fecha de caducidad.

Almacenar la solución de hematoxilina, Gill Nº 3 a temperatura ambiente (18–26 °C), protegida de la luz. La etiqueta del reactivo indica la fecha de caducidad. Filtrar antes de su uso. Se recomienda devolver el material a su envase original después de su uso. Desechar si la solución se vuelve marrón (sobreoxidación por aire) o púrpura (pérdida de acidez).

Almacenar la solución de glutaraldehído en el frigorífico (2–8 °C). La etiqueta del reactivo indica la fecha de caducidad. Desechar si presenta turbidez.

La solución fijadora de glutaraldehído es estable durante varios meses si se almacena en una botella de vidrio cerrada herméticamente y guardada en el frigorífico (2–8 °C).

PREPARACIÓN:

Preparar la solución fijadora añadiendo 25 ml de ACS o acetona de grado reactivo a 75 ml de solución de glutaraldehído, número de catálogo 380-2.

SISTEMA DE TINCIÓN

PROCEDIMIENTO

RECOGIDA DE LA MUESTRA:

Se recomienda que la recogida de la muestra se lleve a cabo de acuerdo con las directrices del documento M29-A2 de la NCCLS. Ningúnmétodo de prueba puede garantizar la completa seguridad de que las muestras de sangre o tejido no transmitan infecciones. Por lo tanto, todos los derivados de la sangre o tejido deben considerarse potencialmente infecciosos.

Pueden utilizarse frotis de sangre total o anticoagulada o de médula ósea recién preparados. Fijar cuanto antes.

MATERIAL ESPECIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO:

Acetona, reactivo ACS

NOTAS:

A efectos de comprobación del funcionamiento del sistema, se recomienda procesar los frotis de sangre procedentes de donantes sanos junto con las muestras de paciente.

Los datos obtenidos mediante este procedimiento sólo sirven como ayuda en el diagnóstico y deben ser revisados junto con otras pruebas clínicas o información de diagnóstico.

PROCEDIMIENTO:

...