Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofotómetro

CUESTIONARIO

1) Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofotómetro

El funcionamiento de un espectrofotómetro consiste en iluminar la muestra con luz blanca y calcular la cantidad de luz que refleja la muestra en una serie de intervalos de longitudes de onda. El instrumento se calibra con una muestra o loseta blanca cuya reflectancia en cada segmento de longitudes de onda se conoce en comparación con una superficie de reflexión difusa perfecta.

La reflectancia de una muestra se expresa como una fracción entre 0 y 1, o como un porcentaje entre 0 y 100. Es importante darse cuenta de que los valores de reflectancia obtenidos son valores relativos y, para muestras no fluorescentes, son independientes de la calidad y cantidad de la luz usada para iluminar la muestra. Así, aunque los factores de reflectancia se midan usando una fuente de luz concreta, es perfectamente correcto calcular los valores colorimétricos para cualquier iluminante conocido.

2) ¿Qué diferencias existen entre un fotocolorímetro y un espectrofotómetro?

 Los Espectrofotómetros utilizan como fundamento los fenómenos que le ocurren a la luz una vez que interactúa con la muestra, tales como la absorción, reflexión, difracción.

 Los Espectrofotómetros utilizan dispositivos como detectores, monocromadores, polarizadores de luz, condensadores y otros aditamentos, mientras que los colorímetros usan el criterio humano como referencia, lo cual los hace altamente inexactos.

 Un Fotocolorímetro es un equipo similar, pero este lee en longitudes de onda del rango "Visible", se utiliza generalmente para determinar con exactitud el color de una substancia, ya sean soluciones o sustratos sólidos como tintas o pinturas.

3) ¿Qué relación matemática existe entre absorbancia y transmitancia?

El logaritmo:

Donde Abs es absorbancia, T es transmitancia, I es intensidad transmitida (la intensidad de la luz luego de atravesar la muestra) y Io es intensidad incidente (la intensidad de luz antes de atravesar la muestra).

4) Construya una curva de calibración con los siguientes valores :

Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 Standard 5

Concentración

5mg/dl

10mg/dl

20mg/dl

30mg/dl

40mg/dl

Absorbancia

...