INVESTIGACIÓN SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA CATECOLASA.

PRÁCTICA 5.

INVESTIGACIÓN SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA CATECOLASA.

INTRODUCCIÓN.

Durante esta práctica se estudiará la actividad de la enzima catecolasa contenida en algunas frutas y vegetales. Las papas peladas y las frutas machucadas se tornan cafés cuando son expuestas al aire debido a que la catecolasa facilita una reacción entre el catecol y el oxígeno. En presencia de oxígeno, el catecol es oxidado por la remoción de dos átomos de hidrógeno. El catecol es así convertido en benzoquinona, y el oxígeno es reducido por la adición de dos átomos de hidrógeno para formar agua. Las moléculas de benzoquinona se unen luego para formar cadenas largas y ramificadas. Estas cadenas son la base estructural de los pigmentos melanoides rojo y café que causan el oscurecimiento.

OBJETIVOS.

• Determinar los efectos de la temperatura sobre la actividad enzimática catecolasa.

• Determinar los efectos del pH sobre la actividad enzimática catecolasa.

• Describir los efectos del cambio en la concentración de enzima sobre la tasa de reacción catalizada por la enzima.

• Describir la relación entre la concentración de sustrato y la máxima velocidad de la reacción enzimática.

Nota: tenga en mente que, aunque esté utilizando jugo de papa en estos experimentos, Usted está en realidad trabajando con un extracto enzimático.

MATERIAL.

Por equipo.

 26 tubos 16 x 150

 75 mL de jugo de papa (guardar en frasco ámbar)

 Baño de hielo

 Baño maría

 Termómetro

 200 mL de buffer de fosfatos pH 7.0, 0.01 M

 10 mL de cada uno de los siguientes buffer de fosfatos (0.01 M): pH 4.0, 6.0, 8.0, 10.0

 50 mL de solución de catecol 0.05 M (guardar en frasco ámbar y evitar contacto con la luz y aire)

 2 goteros

 Parafilm

PROCEDIMIENTO.

PARTE I. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática.

Como la mayoría de las reacciones químicas, la tasa de reacción de una reacción catalizada enzimáticamente se incrementa al incrementar la temperatura

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