Metabolismo Proteico

EXPERIMENTACIÓN

Metabolismo proteico (uso de peptonas)

METODOLOGÍA.

Prueba de indol.- Utilización de triptófano en la formación de indol, utilizando el reactivo de kovac’s para su comprobación.

Materiales

• Agua de Triptona.

• Tubo de ensayo.

• Mechero de alcohol.

• Fósforos.

• Asa.

• Pipeta

• Algodón.

• Papel de Aluminio.

• Reactivo de Kovac´s

• Muestra

• Agua de Peptona.

Muestra.

Se utilizaron dos tipos diferentes de muestras, las cuales fueron sometidas a un pre-enriquecimiento en agua de peptona por 48 horas; las muestras fueron: carne podrida y una pequeña muestra de heces fecales obtenida de los baños de la universidad.

MEDIOS DE CULTIVO.

Agua de Peptona.

Medio de pre-enriquecimiento recomendado para su empleo previo al enriquecimiento selectivo y aislamiento de especies

Fundamento

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos, a los que ha sido sometido el alimento. Si es utilizado como medio base para la fermentación de hidratos de carbono, se debe adicionar el indicador de Andrade y el hidrato de carbono en cuestión.

Fórmula

Incubación

Aeróbica, a 35-37 ºC durante 18-24 horas.

Resultados

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.

Preparación.

• Disolver 20g/litro

• Repartir en recipientes y esterilizar en auto clave (15min, a 120°C)

• pH: 7.2 ± 0.2

• caldo ámbar claro.

Procedimiento.

1. Preparar 135 ml de agua de peptona.

20g 1000ml

Xg 135ml X=2.7gr

2. Repartir en recipientes para el pre-enriquecimiento y autoclavarlos

3. Colocar las diferentes muestras dentro de ellos, incubarlo por 48 horas a 35-37 °C

Agua de Triptona.

Medio líquido recomendado para enriquecimiento y para verificar la producción de indol por los microorganismos.

Fundamento.

El agua triptona, por su base nutritiva, permite el desarrollo de diversas especies bacterianas, y debido a su alto contenido de triptofano, es un buen sustrato para la producción de indol.

Fórmula.

Siembra

Inoculación directa del material en estudio en tubos conteniendo agua triptona.

Incubación

Aeróbica, a 35-37 ºC durante 24-48 horas.

Prueba del Indol

Utilizar el reactivo de Kovac´s: se considera un resultado positivo el desarrollo de un color rojo.

Composición del Reactivo de Kovac’s

Es una sustancia usada para la determinación de indol microbiano en la identificación de microorganismos indol (+) o de indol (-). Está compuesto por:

• Butanol

• 4-dimetilaminobenzaldehído

• Ácido

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