Reconocimiento de nutrientes

Guía n°4 Reconocimiento de nutrientes

Objetivos:

- Los estudiantes reconocerán la presencia de carbohidratos, aminoácidos aromaticos, proteínas y lípidos mediante ensayos característicos

Introducción:

Reactivo de Benedict:

Algunos azúcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el ión Fe3+ o Cu2+. Esta característica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre (c=o), el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo (-COOH). Por lo tanto, aquellos azúcares con un grupo carbonilo libre son llamados azúcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unión glicosídica se conocen como azúcares no reductores.

Existen varias reacciones químicas que permiten determinar si se está en presencia de un azúcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reacción o no de un azúcar con el ion Cu2+. El reactivo de Benedict contiene soluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solución un pH alcalino necesario para que la reacción pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion Cu2+ en solución ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le agrega al reactivo una solución de azúcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullición, el azúcar en solución alcalina a elevadas temperaturas se convertirá en D-gluconato y su ene-diol, rompiéndose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos, reaccionarán con el Cu++. Se obtiene entonces un azúcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la solución para formar el hidróxido de cobre:

Cu + + OH - → Cu(OH) (precipitado amarillo)

El hidróxido pierde agua

2Cu(OH) → Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O

La aparición de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azúcar reductor.

Reactivo de Lugol:

El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro de potasio permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración azul- violeta intensa, por otra parte el glicógeno (insolubles en agua) y las dextrinas (solubles en agua) por formación de coloración roja.

Es una reacción específica del almidón, el reactivo de lugol se intercala por la molécula

de almidón y esto se detecta por la coloración violeta que toma la mezcla.

Este polisacárido esta formado por moléculas de glucosa y es exclusivo de las células

vegetales.

Realmente está formado por dos tipos de polímeros ambos de glucosa: la amilosa que

es la que realmente se tiñe con el yodo del lugol y la amilopectina.

Amilosa

Amilopectina

Reacción Xantoproteica

Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos.

Reactivo de Biuret

La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídicos (-CO-NH -)que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de fórmula:

que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica.

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).

Reconocimiento de lípidos

Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III.

Materiales Reactivos

Desarrollo:

• Reconocimiento de Almidón

I. Se dispone en un vidrio reloj una pequeña cantidad de las siguientes muestras:

a. Harina

b. Semolina

c. Afrechillo

d. Afrecho

...