AISLAMIENTO DE DNA

PRACTICA No. 13 (C)

AISLAMIENTO DEL DNA PLASMÍDICO

INTRODUCCIÓN

En todas las células, el material genético es el DNA, mientras que un determinado virus puede poseer cualquiera de los cuatro tipos de ácido nucleico como material genómico: DNA o RNA de una sola cadena o de doble cadena.

El DNA se encuentra en sólo un número limitado de formas en células tanto procarióticas (bacterias, algas verdeazules), como eucarióticas (hongos, plantas, animales). La complejidad del cromosoma de E. coli, determinada mediante análisis de hibridación molecular, y su tamaño físico, determinado mediante microscopia electrónica y otras técnicas son consistentes. Es decir parece que el cromosoma procariótico es una sola molécula de ADN larga, circular y de doble cadena. La longitud del contorno de dicho DNA tiene más de 1 mm, mientras que la dimensión mayor de la célula bacteriana es de casi 0.001 mm. El DNA esta superenrollado y forma un complejo con proteínas y RNA, los cuales al parecer contribuyen a darle una conformación compacta al DNA contenido en la célula bacteriana.

Las bacterias pueden adquirir elementos de DNA extracromosomicos llamados plásmidos. Los plásmidos son círculos de doble cadena con un tamaño de casi 4 hasta mas de 200kb. Estas estructuras se duplican independientemente del cromosoma bacteriano. Esta existencia semiautónoma es posible debido a que el plásmido codifica parte de la información genética necesaria para su duplicación, y por lo general la célula bacteriana continua manteniendo al plásmido debido a que este contribuye con alguna función que le da a la bacteria una ventaja selectiva. Las "cepas bacterianas de hospital" que tienen la capacidad de duplicarse aun en presencia de antibióticos han adquirido de uno a varios plásmidos de resistencia a estos fármacos. En general, los plásmidos controlan el número de copias del plasmado que existen por cétüla, que puede ser de sólo 1 a 3 ó 30, o más. De modo usual los plásmidos de mayor tamaño existen en un menor número de copias.

Otros ejemplos de funciones codificadas por estas células son:

1.- Formación del pilus F o tubo de conjugación, una estructura que facilita la transferencia de plásmidos de una célula bacteriana a otra.

2.- Producción de toxinas que inhiben o destruyen bacterias emparentadas pero que carecen de plásmidos.

3.- Capacidad para metabolizar ciertos compuestos necesarios para la nutrición de la célula bacteriana.

OBJETIVO

 Obtener DNA plasmidico

 Al DNA tratarlo en electroforesis en azarosa para poder observar los efectos libres sobre los radicales libres sobre este.

DISCUSIÓN

En el manual la solución I original es Tris-EDTA-Rnasa A, pero a la Rnasa A cambiamos por glucosa, ya que si trabajáramos con Rnasa A eliminaríamos RNA presente y no veríamos el efecto de los radicales li

Durante toda la practica el tratamiento del DNA se hizo con mucho cuidado ya que de lo contrario lo "romperíamos".

Al revelar la placa y al observarla en la cámara de rayos ultravioleta, nos pudimos dar cuenta que trabajamos bien, ya que a pesar de que aparecía solo una "línea" (además de RNA), esta correspondía al DNA de tipo súper enrollado, que es el que nosotras estábamos tratando de obtener. La "línea" era tenue, esto lo atribuimos a que extrajimos muy poca cantidad de DNA. Pero podemos decir que se trabajo bien puesto que encontramos DNA de la forma súper enrollada solamente.

CONCLUSIONES

Obtuvimos DNA de un plasmado

Observamos por medio de electroforesis la acción de radicales libres

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