ASILAMIENTO DE ADN EN CÉLULAS EUCARIONTES

ASILAMIENTO DE  ADN EN CÉLULAS EUCARIONTES

Luisa Aponte Villadiego, José Hernández Vargas, Michael Núñez Torres, Mario Velásquez Mora, Dayana Villadiego Chica

Horario de Laboratorio: 3:00-6:00 p.m.

aponte.luisa2001@gmail.com

Resumen

El ADN es un ácido nucleico contenedor de las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y el funcionamiento de todos los seres vivos, este a su vez es responsable de la transmisión hereditaria. A nivel de laboratorio se busca separar el material genético (ADN) de las muestras para posterior estudio profundo de este. En la práctica se utilizó la cebolla como muestra y se realizó la separación del ADN de los restos de los componentes. Se observó un sobrenadante con el ADN de la cebolla ya separado del resto de la muestra. Este ADN puede ser utilizado para realizar análisis sobre la información genética que porta la muestra y pruebas de replicación, como la reacción en cadena de la polimerasa.

Palabras claves: ADN, Polimerasa, instrucciones genéticas.

Abstract

DNA is a nucleic acid container of the genetic instructions used in the development and functioning of all living beings, this in turn is responsible for hereditary transmission. At the laboratory level, we seek to separate the genetic material (DNA) from the samples for further study. In this case, the onion will be used as a sample and the separation of the DNA from the sample will be carried out step by step as the methodology shows. This will leave us a super-swimmer with the onion DNA already separated from the rest of the sample. This DNA can be used to perform analyzes on the genetic information carried by the sample and replication tests, such as the polymerase chain reaction.

Keywords: DNA, Polymerase, genetic instructions.

Introducción

La extracción de ADN de células eucariotas se basa en los mismos principios que aquellos descritos por las células procariotas, sin embrago, a diferencia de las bacterias, las células eucariotas también requieren la eliminación de la  membrana nuclear  para liberar los ácidos nucleicos, lo cual no implica mayores complicaciones. Para la extracción de ADN, animal o vegetal, se puede disponer de una gran variedad de tejidos y por lo general en cantidades pequeñas. Los procedimientos han sido depurados y por lo general no existen grandes problemas que impidan hacer extracciones exitosas.  El análisis de ADN de células eucariotas es ampliamente requerido, no solo para el conocimiento de número de bases y orden de sus secuencias (genómica). Sino con otros muchos fines que incluyen aspectos tan importantes como la taxonomía, la evolución, la genómica comparativa, la Ingeniería genética, entre otros campos de la biología (Griffiths, et al. 1990).

Existe un gran número de procedimientos para la extracción de  ADN. Estos varían de acuerdo a los tejidos del que se hace la extracción, el grado de pureza que se requiere y los fines que se persiguen. En la actualidad es posible obtener  muestras de ADN de huesos, manchas de sangre, semen, saliva, lo que ha permitido que los estudios de ADN se conviertan en herramientas importantes para la medicina legal y forense, así como la criminalística (Winchester, et al. 1996).

Aunque es posible disponer de procedimientos comerciales, rápidos y efectivos, las técnicas de extracción tradicionales siguen siendo extensamente utilizadas en laboratorio.

Metodología

Para poder extraer ADN de células eucariotas, primero se cortó una cebolla (Figura 1) en pequeños pedazos para ser licuada en 100ml de agua (Figura 2). Si la mezcla estaba muy espesa se agregaba más agua.  

[pic 1]Figura 1. Cebolla cortada[pic 2]

[pic 3]

Figura 2. Cebolla licuándose con agua.

La mezcla se pasó a un beaker y se agregaron 5ml de shampoo H&S y ¼ de cucharada de sal (Figura 3). Todo esto se mezcló durante 15 minutos y luego se filtró con una gasa (Figura 4).

[pic 4][pic 5]

Figura 3. Mezcla de cebolla con shampoo y sal.

[pic 6]

Figura 4. Filtración de la mezcla.

De la solución filtrada se agregaron 1oml en un tubo de ensayo y luego 10ml de etanol industrial frío (Figura 5). Posteriormente se observaron los resultados.

[pic 7][pic 8]

Figura 5. Tubo con mezcla de cebolla y etanol.

Resultados y discusión

Se obtuvo ADN de la cebolla (células eucariotas). Este se vio evidenciado en el tubo con la formación de 3 fases: la primera de cebolla y shampoo; la segunda de alcohol; y finalmente en la parte superior,  la fase en donde se encontraba el ADN (Figura 6).

[pic 9][pic 10][pic 11]

Figura 6. Tubos donde se indica la presencia de ADN.

La extracción de ADN requiere una serie de fases básicas. En primer lugar se tiene  que romper la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula (Leticia & Estefanía, 2017); esto se dio gracias al shampoo (H&S), quien al entrar en contacto con las células, captura los lípidos y las proteínas que hacen parte de las membranas, haciendo que la membrana se rompa para dejar libre el ADN.  También permite que las proteínas de gran tamaño que acompañan al ADN sean más pequeñas y se puedan separar.  

El ADN debe ser protegido de enzimas que puedan degradarlo, por tanto hay que  aislarlo y hacer que precipite, ya que este es soluble en agua; esta fase se logra con ayuda  del etanol industrial frío.

La insolubilidad del ADN en el agua se logra gracias a la sal, quien impide que las cargas negativas de los grupos fosfatos en el ADN interactúen con el agua, favoreciendo a la precipitación en la solución de etanol, donde se va a desenrollar, ya que en este no es soluble.

Finalmente se logra aislar el ADN de los demás componentes de las células.

La técnica usada en la práctica requiere de un proceso secuencial, en el cual se buscó aislar el ADN de los demás componentes de la célula por medio de reactivos como shampoo, sal y etanol, que hicieron posible este aislamiento. Sin embargo, hay que tener en cuenta que en producto final no solo podría haber ADN, sino también ARN y proteínas.

Conclusión

Se pudo obtener ADN de cebolla Allium cepa utilizando shampoo (H&S) sal y etanol mediante un protocolo sencillo en el laboratorio de genética.  

Preguntas complementarias

...