Aislamiento de DNA PLASMÁTICO
Enviado por Karina Fonseca • 29 de Marzo de 2016 • Trabajos • 607 Palabras (3 Páginas) • 194 Visitas
Introducción
El término DNA recombinante significa la unión o recombinación de dos piezas de DNA de dos diferentes especies, ésta técnica permite purificar un gen de una especie para insertarlo al DNA de otras especies donde se replica junto con el DNA del hospedero.
Muchas bacterias contienen también otras moléculas de DNA circular pequeño denominadas plásmidos que se encuentran separadas del cromosoma de la célula, aunque no son necesarios para la división celular, los plásmidos normalmente proporcionan a la célula alguna ventaja metabólica sobre alguna otra célula que carezca de ellos.
Por ejemplo en los plásmidos se encuentran segmentos de DNA que codifican la resistencia a antibióticos y otras sustancias tóxicas como metales, estas células continúan creciendo y reproduciéndose, mientras que las células susceptibles mueren.
Objetivos
Aislar DNA plasmídico bacteriano, comprobando dicho aislamiento mediante electroforesis en gel de agarosa.
Resultados
Discusiones
La solución 1 contiene TEG con glucosa, es una solución isotónica lo que hace que la presión osmótica se mantenga, asi como también protege al DNA de las DNRasas, pues estas contienen magnesio que provocan el rompimiento del DNA, entonces el TEG inhibe la acción del magnesio que pueda afectar al DNA.
La solución II contiene NaOh y contiene detergente dodecilsulfato de sodio, es un tenso activo y ayuda a la lisis y disolución de la membrana por las sales del NaOH y el DSS, sobre todo provocan la lisis de la célula. Como el pH de esta solución es de
10, todo el contenido de la célula se va a desnaturalizar lo que provoca que salga todo el contenido de la célula, en este caso lo importante es la salida del DNA plasmidico y cromosomal
La solución III tiene un pH de 4.6, contiene ácido acético y acetato de potasio, quienes provocan una neutralización agresiva, por lo que el DNA intenta renaturalizarse, asi como también las proteínas que pudieron desnaturalizarse.
La solución IV contiene isopropanol, quien precipita a las moléculas del DNA plasmídico, por la constante dieléctrica, la centrifugación desúés de agregar esta solución ayuda a acelerar el proceso de precipitación, además de que al final de la centrifuga eliminaremos al alcohol en el sobrenadante.
Finalmente la solución V contiene tris y EDTA más agua, lo que provoca de nuevo una precipitación y protección para el DNA, el tris mantiene el pH adecuado para protegerlo. La solución reguladora utilizada al final contiene azul de bromofenol que cambia de color cuando el pH= 7
La electroforesus es una técnica de separación de moléculas en base a su tamaño, a su carga eléctrica y forma, en este caso utilizamos agarosa como el soporte en el que se llevo a cabo la electroforesis para separar a las moléculas, el DNA tiene una carga negativa , y la electroforesis está en condiciones de carga positiva, por lo que las moléculas de DNA que deseemos separar correrán hacia el lado con carga opuesta de estas, y se detendrán hasta donde su tamaño lo permita, el revelado con azul de bromofenol indica cuánto ha migrado cada molécula.
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