Aislamiento de hemoglobina en la sangre y analisis de sus derivados

Aislamiento de hemoglobina en la sangre y analisis de sus derivados

Resumen

El objetivo principal de la practica observar los diversos derivados de la hemoglobina, los reactivos que se utilizaron para la elaboracion de este analisis fue el reactivo de Stoke, ferricianuro de potasio, y acido ascrobico. Por medio de estos analisis se pudo determinar los derivados de la hemoglobina, como metahomoglobina, oxihemoglobina y deoxihemoglobina. En la oxihemoglobina se obtuvo una absorbancia maxima en 540 y 570nm, en la metahemoglobina de igual manera se obtuvo una absorbancia maxima en 540 y 570nm, en la deoxihemoglbina hubo una absorbancia maxima en 500nm.

Objetivos

• Efectuar el aislamiento de la hemoglobina a partir de sangre humana.

• Realizar experimentalmente la transformacion de la hemoglobina a diferentes derivados de la misma.

Introduccion

La hemoglobina (HB) es una proteína globular, que esta presente en altas concentraciones en lo glóbulos rojos y se encarga del transporte de O2 del aparato respiratorio hacia los tejidos periféricos; y del transporte de CO2 y protones (H+) de los tejidos periféricos hasta los pulmones para ser excretados. Los valores normales en sangre son de 13 – 18 g/ dl en el hombre y 12 – 16 g/ dl en la mujer.. La hemoglobina es una proteína con estructura cuaternaria, es decir, esta constituida por cuatro cadenas polipeptídicas (fig. 1): dos α y dos β (hemoglobina adulta- HbA); dos α y dos δ (forma minoritaria de hemoglobina adulta- HbA2- normal 2%); dos α y dos γ (hemoglobina fetal- HbF). En el feto humano, en un principio, no se sintetizan cadenas alfa ni beta, sino zeta (ζ ) y epsilon (ξ) (Hb Gower I). Al final del primer trimestre la subunidades α han reemplazado a las subunidades ζ (Hb Gower II) y las subunidades γ a los péptidos ξ. Por esto, la HbF tiene la composición α2γ2. Las subunidades β comienzan su síntesis en el tercer trimestre y no reemplazan a γ en su totalidad hasta algunas semanas después del nacimiento. Las cadenas polipeptídicas alfa contienen 141 aminoácidos, las no alfa 146 (β, γ, δ) y difieren en la secuencia de aminoácidos. Se conoce desde hace décadas la estructura primaria de las cuatro cadenas de Hb normales. La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7 segmentos no helicoidales. Cada cadena α esta en contacto con las cadenas β, sin embargo, existen pocas interacciones entre las dos cadenas α o entre las dos cadenas β entre si. (Miale, 1985)

Metodologia

Lo primero que se hizo fue la centrifugacion de 50ml de hemoglobina, ya centrifugado se decantaron y se lavaron los eritrocitos con cloruro de sodio. Se agrego 1.2 ml de agua y 0.4 de touleno, se mezclo y se descarto la capa de touleno, obteniendo asi el concetrado de oxihemoglobina. Ya teniendo la oxihemoglobina se prepraro una solucion con 0.5ml de solucion con 20ml de agua destilada. Para la preparacion de la deoxihemoglobina se preparo a la cual se leagrego 4ml de solucion diluida con el reacgivo de stoke amoniacal a la solucion. Para la preparacion de metahemoglobina se le adiciono ferricianuro de potasio al 10% a 4ml de la solucion. se analizo cada una de las soluciones preparadas en un espectro a una absorbancia de 0.5M a 500nm.

Resultados

Tabla No. 1 Longitud de onda y absorbancia de Oxihemoglobina

Grafica No. 1 Espectro de absorbacina de oxihemoglobina.

Esta grafica muestra la absorbancia de la oxihemoglobina, en la que se puede observar que hubo una absrobancia maxima en 540 y 570nm.

Grafica No. 2 Espectro de absorbacina de la deoxihemoglobina

Esta grafica muestra la absorbancia de la deoxihemoglobina, en la que se puede observar que hubo una absrobancia maxima en 540 y 570nm.

Grafica No. 3 Espectro de absorbacina de metahemoglobina.

Esta grafica muestra la absorbancia de la metahemoglobina, en la que se puede observar que hubo una absrobancia maxima en 540 y 570nm.

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