Aislamiento de proteínas

UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NÚCLEO SUCRE

ESCUELA DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA

Trabajo practico N°3. Aislamiento de proteínas

Profe. Patricia Velásquez

Realizado por:

Nataly Ruiz C.I 25.249.133

Cumaná, Octubre 2014

 METODOLOGÍA

Se aislaron fracciones de albuminas y de globulinas a partir de dos variedades de semillas de caraotas (Phaseolus vulgaris; variedades blancas y negra) y de haba de burro (Cavalina enciformis), de estas se extrajeron alícuotas de 10ml de albumina y 10ml de globulina y a cada uno de los extractos se les añadió dodecilsulfato de sodio (SDS) el cual carga negativamente las moléculas de proteína y azul de bromofenol que actúa como un colorante que permite observar la distancia recorrida por las proteínas. Las distintas muestras se colocaron en un baño de agua hirviendo por 3 min y luego se colocaron en un gel de poliacrilamida en el cual previamente se moldearon siete bolsillos, antes de comenzar la electroforesis se coloca un sistema de buffer el cual actúa como conductor eléctrico una vez que se le aplica cierto voltaje. Luego que se le empleo el voltaje a la muestra e inicio el proceso de electroforesis, las muestras empezaron a penetrar en el gel y luego de cierto tiempo quedaron concentradas en una banda. Debido a que el duodecisulfato de sodio carga negativamente las moléculas de proteína una vez que se aplica el voltaje a la muestra este les permite ser atraídas hacia la base, las proteínas de menor peso molecular pueden travesar más fácilmente el gel de poliacrilamida por lo tanto pueden recorrer mayores distancias, mientras que las de mayor peso molecular quedan concentradas a menor distancia. La corrida electroforética se detuvo cuando el ABF(distancia reocorrida) alcanzo una distancia de 6,3 cm con respecto al origen. Por ultimo se tiño con azul de Coomasie, se elimino el exceso de colorante y se seco al vacio a 50°C quedando un perfil que contiene los resultados obtenidos del experimento y los marcadores proteicos de peso molecular conocidos.

Para determinar el peso molecular de las proteinas problemas se midio la distancia que recorrienron los marcadores proteicos de peso molecular conocido desde el origen hasta el ABF(distancia reocorrida), se calculo Rf dividiendo la distancia que estas recorrieron entre la distancia del ABF, se hizo una grafica con los valores de la masa molecular de estas y los calculos realizados, luego

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