Amonoácidos Y Proteinas , Guia De Laboratorio

Guía Nº 3: Aminoácidos y Proteínas

INTRODUCCIÓN

El nombre proteína proviene de la palabra griega proteios que significa lo primero. Constituyen gran parte del cuerpo animal, lo mantienen como unidad y lo hacen funcionar. Se las encuentra en toda célula viva. Son el material principal de la piel, los músculos, tendones, nervios y la sangre, enzimas anticuerpos y muchas hormonas.

Desde el punto de vista químico son polímeros constituidos por la unidad básica que los une, los aminoácidos. Estos monómeros poseen un grupo amino y otro carboxilo H2NCHR-COOH. Los análisis de un amplio número de proteínas de casi cualquier procedencia que pueda concebirse han mostrado que todas las proteínas están compuestas por 20 aminoácidos estándar solo que en diferente orden. Las proteínas varían entre ellas porque tienen una secuencia de aminoácidos diferente.

Las proteínas se pueden clasificar por su forma. Las proteínas globulares son cadenas polipeptídicas dobladas en forma compacta, estas son solubles en agua y difunden fácilmente. Las proteínas fibrosas son insolubles, largas, con cadenas polipeptídicas que se extienden y se doblan. Hay una clase de proteínas filamentosa que participa en los eventos contráctiles.

Cada proteína tiene una forma única, la que le permite presentar una función determinada (transporte, catálisis, etc.). Cuando las proteínas se exponen a ciertos agentes químicos y/o ambientales, la estructura de las proteínas se altera, alterándose además su forma, lo que finalmente tiene como consecuencia el que la proteína pierda su función. Este proceso se conoce como “desnaturalización de proteínas”. Entre los agentes desnaturalizantes se encuentran: las altas temperaturas, rayos UV, ácidos y bases fuertes, solventes orgánicos y sales de mercurio y plomo. Dependiendo del grado de alteración de la proteína, la desnaturalización puede ser reversible (si la desnaturalización es poco agresiva), o irreversible (si la desnaturalización es agresiva).

En este laboratorio se aplicarán algunos métodos de reconocimiento de péptidos y proteínas, y se observará la acción de varios agentes desnaturalizantes y de sus consecuencias.

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales

- Tubos de ensayo - Pinzas de madera

- Gradilla - Vasos de precipitados de 250 mL

- Baño de agua (o mechero, rejilla y trípode) - Etanol

- Pipetas graduadas de 5 y 2 mL - HCl (concentrado)

- Reactivo de Biuret - NaOH al 20 %

- Leche - Solución de Albúmina (clara de huevo)

- Ácido Nítrico concentrado - Pinzas de madera

- Cinta para etiquetar - Pipetas Pasteur

- Espátulas - Baño de agua

- Termómetro - Cinta para etiquetar

- Aminoácidos - Solución de HgCl2

- Hígado - Agua oxigenada

Métodos

Desnaturalización de proteínas

Acción de agentes desnaturalizantes

1.- Colocar en 5 tubos de ensayo 2 o 3 mL de clara de huevo. En otros 5 tubos de ensayo coloque 2 o 3 mL de leche.

2.- Caliente un tubo con leche y otro con clara de huevo en un baño de agua a ebullición por lo menos 10 minutos.

3.- Tome uno de los tubos con leche y otro con clara de huevo y agregue gotas de HCl conc.

4.- Tome uno de los tubos con leche y otro con clara de huevo y agregue gotas de NaOH conc.

5.- Tome uno de los tubos con leche y otro con clara de huevo y agregue 2 mL de alcohol etílico.

6.- Tome uno de los tubos con leche y otro con clara de huevo y agregue 10 gotas de solución de HgCl2.

- Interprete sus resultados, indicando a qué nivel estructural de la proteína actúa el agente desnaturalizante (estructura 1ª, 2ª, 3ª o 4ª).

Entregue los resultados al profesor

Reconocimiento de la catalasa

Las catalasas son un tipo de enzimas que se encuentran en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular se forma una molécula toxica que es el peróxido de hidrógeno o agua oxigenada. Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, eliminando de esta manera la molécula tóxica.

En esta primera experiencia se observará su existencia.

1. Colocar en un tubo de ensayos un trozo pequeño de hígado

2. Añadir unas gotas de agua oxigenada y observar.

Desnaturalización de la catalasa

1.- Colocar en un tubo de ensayos trocitos de hígado, luego agregar 5 mL de agua destilada y calentar hasta ebullición por unos 5-10 minutos.

2.- Retirar el agua.

3.- Colocar unas gotas de agua oxigenada al hígado y observar

Entregue los resultados al profesor

Reacciones coloreadas para reconocer péptidos y proteínas

Reacción Xantoproteica: Se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da positiva en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos fenólicos como la tirosina. Esta reacción se debe a la nitración de los anillos fenólicos en la tirosina para dar sustitutos nitrogenados de color amarillo. Las manchas amarillas en la piel causadas por el ácido nítrico son el resultado se una reacción xantoproteica.

1.- Colocar en tubos de ensayo diferentes 2 a 3 mL de clara de huevo, 2 a 3 mL de clara de leche, 2 a 3 mL de solución de los aminoácidos alanina y fenilalanina,

2.- Añadir 1 mL de ácido nítrico a cada tubo.

3.- Calentar en baño de agua.

4.- Enfriar en agua fría.

- Explique con ecuaciones químicas lo ocurrido.

Entregue los resultados al profesor

Reacción de Biuret

Reaccionan péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que en la reacción están involucrados los enlaces peptídicos (-CO-NH-). Los átomos de cobre del reactivo se unen a los grupos amino, lo que provoca una coloración violeta. Hay que tener en cuenta que la reacción es positiva de tripéptidos en adelante, y que esta reacción puede tardar entre 15 a 30 minutos para observar los cambios de color.

1.- Colocar en tubos de ensayo diferentes 1 mL de: solución de alanina, de fenilalanina, leche y solución de clara de huevo.

2.- Añadir 2 mL de solución de NaOH al 20% a cada tubo.

3.- A continuación agregue 5 gotas del reactivo de Biuret.

- Explique con ecuaciones químicas lo ocurrido, e interprete sus resultados.

Entregue los resultados al profesor

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